RNase抑制剂(人源)(40U/μL)特价优惠

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名称：RNase抑制剂(人源)(40U/μL)特价优惠
产地：国产|进口
编号：BTN3290
品牌：百奥莱博
规格：2500U
英文名：RNase Inhibitor From Human
本品是从细菌中分离的重组人RNase Inhibitor，其分子量为50 KD，能通过与RNase A 1:1形成非共价的复合体而抑制后者的活性，Ki为3*10-14M，该反应是可逆的，通过尿素及硫基类试剂能够解离复合体，使RNase 复活而抑制剂不可逆失活。本品属蛋白质性质，与其它竞争性抑制剂(核酸类、无机磷酸类)不同，可以很容易地通过*酚处理将其从反应体系中除去。

产品特点：
1. 抑制范围广，可以抑制RNase A、RNase B、RNase C等RNase的活性，但不能抑制RNase T1、RNase H、S1 RNase和Aspergillus RNase的活性。
2.与SP6、T3和T7 RNA polymerase、AMV和MMLV 逆转录酶、Taq DNA聚合酶等兼容。
3.在广泛的pH范围(pH5-8)有活性。
4. 应用范围广，可以用于RT-PCR、cDNA 合成、in vitro transcription or translation等需要抑制RNase活性的酶反应中。

储存条件：低温运输，-20℃及保存，有效期一年。

使用方法：一般在有RNA的反应体系中加1-10U即可。

疑难解答：
Q：本产品抑制 RNase的Ki值是多少？
A：本产品是混合物，不能确定其Ki值。
Q：百奥莱博的液相RNase清除剂和RNA保存液都可以保存 RNA，都能灭活/抑制溶液中 2 ng/μL左右的RNase，它们的主要区别何在？
A：一是原理不同。前者通过共价修饰使 RNase 失活(类似于DEPC)；后者通过竞争抑制保护 RNA(类似于RNase Inhibitor)。二是兼容性不同。前者与很多后续反应兼容，故 RNA可以直接使用；后者会抑制很多后续反应，需要去除后在使用 RNA。三是稳定性不同。后者比前者更稳定，更耐热。

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D-麦芽糖 Nonivamide 69-79-4
ARB12880 小鼠丙*酸*基转移酶(ALT)Elisa分析 Mouse alanine aminotransferase,alt ELISA KIT
F030237 HRP标记山羊抗人IgG FC抗体 HRP*Polyclonal Goat Anti-Human IgG FC
51707-55-2 噻*隆 Thidiazuron (TDZ)
PY08-029  一次性血液增菌培养基 00ml  10支/盒，用于从血液中分离病原菌
荧光素酶 Sodium phosphotungstate 9014-00-0
ARB10552 人孕酮和AdIpoQ受体家族成员Ⅶ(PAQR7)尿液中含量检测 Human progestin and adipoq receptor family member Ⅶ,paqr7 ELISA KIT
乙醇氧化酶 Taq plus DNA Polymerase 9073-63-6
二乙*(代"胺")盐*(代"酸")盐 NAA-K 660-68-4
制霉菌素 Azelaic acid 1400-61-9
SJ0845 新生牛血清
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2′-脱氧胞苷-5′-二磷酸三*盐 Boc-Asp-OH 151151-32-5
ARB10130 人N端外显肽(Ext-N)酶免分析 Human n-terminal extein,ext-n ELISA KIT
SJ0005 熊果酸(标准品) UDCS
PY02-066  抗生素检定培养基Ⅳ号  250克  
ARB13971 猪胰岛素样生长因子结合蛋白-I(IGFBP-I)Elisa方法检测 Porcine igfbp-iELISA KIT
亮绿SF(淡黄) Gelatin Sepharose 4B 5141-20-8
九聚乙二醇单癸醚 β-Naphthaleneacetic acid
3-(环己*基)-1-丙磺酸*盐 3,5-Diiodo-L-thyronine 105140-23-6
CD111 超纯dTTP(100mM)
ARB13207 小鼠高灵敏度促甲状腺激素(U-TSH)酶标法分析 Mouse ultrasensitive thyroid-stimulating hormone,u-tsh ELISA KIT
ARB11337 human胎盘蛋白(PP)酶免分析 Human placental protein,pp ELISA KIT
ARB10047 人ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1基元4(ADAMTS4)elisa检测 Human adam metallopeptidase with thrombospondin type 1 motif4,adamts4 ELISA KIT
PY02-143  四环素检定琼脂  250克  
BL1303 BSA标准品(5mg/ml)
103476-89-7 Leupeptin 亮抑酶肽
BL0878 兔抗人IgM免疫血清 0.5ml
BTN100882 电泳级*酚蓝溶液 Bromophenol Blue Solution, EG
BOC-Nim-苄基-L-组*酸 Chymotrypsinogen A 20898-44-6
9001-12-1 胶原酶Ⅰ CollagenaseⅠ
BFD002 猪蓝耳病毒抗体检测试剂盒
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·尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)
编号：BTN130646
英文名称：Uracil DNA Glycosylase
规格：500U
E.coli尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)催化尿嘧啶从含尿嘧啶的DNA上释放。UDG能有效地水解单链或双链DNA上的尿嘧啶，但不能从6碱基或更少的寡核苷酸上水解尿嘧啶。其反应原理图如下：


活性定义：1单位指每分钟催化60pmol尿嘧啶从含尿嘧啶的双链DNA上释放所需要的酶量。通过检测37℃条件下，30分钟从50μl含0.2μg DNA(10⁴～10⁵cpm/μg)的反应体系中释放 [3H]-尿嘧啶的量来确定活性。

产品应用：在37℃条件下，1单位UDG与0.1μg含尿嘧啶DNA温育10分钟后，此DNA不能再被DNA聚合酶复制。95℃加热10分钟可使该酶95%的活性丧失。由于95℃热处理后该酶仍有部分活性，建议加入尿嘧啶糖基化酶抑制剂来阻止产物DNA的降解，也可以立即用酚/*仿抽提反应产物。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

备注：UDG在较广的pH范围内均有活性，最适pH是8.0，不需要二价阳离子。活性受高离子强度(＞200mM)所抑制。

·植物线粒体纯化试剂盒A(粗提)
编号：BTN111208A
英文名称：Plant Mitochondria Purification Kit(A)
规格：5次
植物线粒体是重要的植物细胞器，负责ATP的产生。此外植物很多重要的特性(如雄性不育)也跟线粒体相关，是母系遗传研究的重要材料。对植物线粒体进行生化和遗传研究都需要进行线粒体纯化。本产品就是专门用于植物细胞线粒体纯化的试剂盒。

产品特点：
1．即用型试剂盒，用户不需要单独配制各种溶液。
2．提供AB 两种进过优化的操作方法，A法利用常规台式冷冻离心机的差速分离原理进行线粒体粗提，所得线粒体含少量其他细胞器污染，可用于后续的SDS-PAGE，Western，ELSIA和蛋白组分析，也可以用于PCR级别的线粒体DNA和RNA提取。
3．B法利用冷冻超速离心(离心力达40000g)制备的密度梯度来将线粒体粗提液中的线粒体和其他细胞成分进一步分开，得到线粒体精提液，适用于后续的偶联分析、体外线粒体蛋白合成、线粒体成份定位等精细实验。也可用于后续的SDS-PAGE、Western、ELSIA、蛋白组分析和测序级别的线粒体DNA和RNA提取。
4．本产品足够5次提取，每次可处理10g绿色植物组织(可得1-2.5mg左右线粒体)或20g非绿色植物组织(可得2-5mg左右的线粒体)。

试剂盒组成：

 

成分	5T(A型)	5T(B型)
匀浆液	250ml	250ml
洗涤液	250ml	250×2
密度梯度离心介质	无	175ml
BSA干粉	5g	10g
带柄尼龙筛	1只	1只
软毛笔	1只	1只
说明书	1份	1份

储存条件：常温运输和保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：线粒体膜对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或者在冷室进行，所用植物组织，器皿和溶液均需要在4℃预冷。任何情况下线粒体的温度都不要超过4℃。

一、选择组织
1．植物组织不同，线粒体产率不同，请以下表为参考：

植物组织种类	线粒体产率	说明
根和块茎	0.3mg/10g	如土豆，红薯等
黄化苗(下胚轴、子叶、胚芽鞘)	2-5mg/10g	多酚含量低于叶片
有光合作用的叶片和子叶	1-2.5mg/10g	需放置在暗处3天

2．一般纯化最好选用用黄化苗。如果用绿色组织(如叶片)，需将植物提前放在暗室至少3 天以降低淀粉含量，否则淀粉颗粒将干扰线粒体的纯化。
3．一次实验需要40mL匀浆液、约90mL洗涤液和35mL梯度离心介质。这些溶液用前均需要加入BSA干粉使其终浓度为0.1%(100mL溶液加0.1g BSA干粉，轻柔颠倒混匀或搅拌溶解后放冰上预冷待用)。每次实验用多少配多少，不要预先将所有BSA干粉加入，否则容易长菌。

二、线粒体粗提(A法)
1．将10 g的绿色植物组织(如去叶脉后的嫩叶子，愈伤组织)或20 g干净的非绿色植物组织(如发芽组织、根、块茎等)浸泡在冰水中10分钟，用纸吸干液体后浸泡在预冷的40mL匀浆液(需先加0.1% BSA)中，在浸泡状态
下剪成1cm2大小的碎片。注意：如果样品可分成多组平行处理，得到线粒体粗提物后再汇集，否则线粒体产率将急剧降低。
2．将匀浆液和其中的植物组织碎片转移到Waring 匀浆器中，中速匀浆3次，每次15秒，每次之间间隔10秒以便让碎片沉淀下来到刀片处。也可使用研磨法。具体操作是将匀浆液和其中的植物组织碎片转移到预冷的研钵中，研磨3-4分钟。注意：植物组织匀浆后释放的物质会使匀浆液酸化，降低pH，而线粒体对pH变化非常敏感，因此建议匀浆后用pH试纸检测匀浆液的pH，如果低于7.0，必须用自备的5 M KOH 将pH调到7.0以上才进入下一步。
3．用带柄尼龙筛过滤匀浆液，穿透液可通过预冷的漏斗收集到预冷的50mL的塑料离心管中。
4．在低速固定角度冷冻离心机上4℃ 1000 g离心5分钟，沉淀为未破碎的细胞、破碎细胞的碎片、细胞核和淀粉颗粒，上清含线粒体。小心转移上清到新的预冷的50mL塑料离心管中。
5．将装上清的离心管在水平冷冻离心机上4℃ 12000 g离心20分钟，弃上清液，所得棕绿色沉淀即为纯化的线粒体粗提物。有时沉淀底部还有白色的淀粉沉淀，属于正常现象。
6．加入10mL预冷的洗涤液(需先加0.1% BSA，下同)中，用软毛笔轻柔重悬线粒体沉淀(如果最地下有白色淀粉沉淀，需要避免重悬之)。不能剧烈震荡，否则线粒体容易破裂。
7．将线粒体重悬液转移到新的50mL离心管中，再加入30mL预冷的洗涤液(终体积为40mL)中，4℃ 1000 g离心5分钟。线粒体将在上清中。
8．将上清转移到新的预冷的50mL离心管中，4℃ 12000 g离心20分钟，沉淀为线粒体。小心弃上清。到此步时，线粒体回收率一般在15-30%。
9．在沉淀中加入2mL预冷的洗涤液。用软毛笔轻柔重悬，得到线粒体粗提液。如果有平行提取，可将最多4 管线粒体沉淀重悬在2mL 洗涤液中。线粒体粗提液中线粒体的回收率一般在45-75%。
10．所得线粒体粗提液含其他细胞器(如类囊体膜，质体，过氧化物酶体，乙*(代"醛")酸循环体,或细菌)污染，但可直接用于PCR级线粒体DNA和RNA的提取、呼吸链功能测定，、蛋白浓度测定和线粒体精提。如果需要长期保存，则可以在线粒体重悬液中加入1/20 体积的自备DMSO，混匀后分成0.5mL/管，然后放-80℃保存。如此保存的线粒体酶活性和膜完整性在几年内都不会发生变化。

三、细胞核DNA的去除(纯化测序级的线粒体DNA 才需要进行此操作。本产品不提供相关试剂，实验步骤仅供参考)
11．预留50μL 线粒体粗提液做对照，在约2mL 剩余的线粒体粗提液中加入40μL 25mM的MgCl2，再加入200ug DNase干粉或溶液(总量为200ug即可)，混匀后冰上放置60分钟降解DNA。取少量样品(如50μL)在PCR仪器中加热到95℃变性10分钟，再取其中的10μL和10μL预留的样品一起进行细胞核基因专一性PCR，如果DNase处理的样品没有扩增，而预留样品有扩增，则表明DNA 去除比较干净(达到PCR 检测的极限)，则进入下一步。如果未去除干净，则继续在冰上放置，直到PCR 检测不到细胞核DNA。
12．加入0.32mL预冷的0.5M的EDTA溶液和40mL预冷的洗涤液。
13．4℃ 1000 g离心5分钟，将上清转移到新的预冷的50mL离心管中，4℃　12000 g离心20分钟，沉淀为去除细胞核DNA的线粒体。重悬在2mL 洗涤液中。

四、线粒体精提(B法，需要40000g的超速冷冻离心机)
14．在50mL预冷的塑料离心管中先后加入35mL预冷的密度梯度离心介质(需先加0.1%BSA)。
15．将2mL 线粒体粗提物重悬液铺在密度梯度离心介质上。
16．在超速水平离心机上4℃ 40000g离心45分钟，最上层为黄色或橙色的质体带(如果材料是绿色植物，此带将是绿色)，其下的白色不透明的带即为线粒体，管底沉淀为过氧化物酶体。其示意图如下：

17．用广口吸管(可将1mL 蓝抢头中间剪断后使用)收集线粒体带，注意避开其上的质体带过氧化物酶体沉淀，估计所取含线粒体溶液的体积。
18．在15-20分钟的时间内缓慢加入至少4倍体积的预冷的洗涤液。
19．转入50mL塑料管离心管中，在冷冻离心机上4℃ 15000g离心20分钟，沉淀为线粒体。
20．将线粒体沉淀用软毛笔小心重悬在至少4倍体积的预冷的洗涤液中，在冷冻离心机上4℃ 15000g离心20分钟，弃上清，沉淀即为洗涤后的线粒体精提物。到此步时，线粒体回收率一般在5-15%。
21．将精提的线粒体重悬在1mL预冷的洗涤液中。重悬的线粒体可以立即使用，在冰上最多可放置5-6小时。如果需要长期保存，则可以在线粒体重悬液中加入1/20 体积的DMSO，混匀后分成0.5mL/管，然后放-80℃保存。如此保存的线粒体酶活性和膜完整性在几年内都不会发生变化。

五、线粒体后续处理(本产品不提供相关试剂，实验步骤仅供参考)
22．DNA提取：离心得线粒体沉淀，再按常规的SDS-蛋白酶K酶解，酚*仿抽提，乙醇-盐沉淀的方法制备线粒体DNA。
23．RNA提取：离心得线粒体沉淀，再按常规的Trizol方法制备线粒体RNA。
24．总蛋白提取：按细菌总蛋白提取方法。
25．线粒体内膜，外膜、基质纯化：需要从本公司定做相关产品。
26．其他功能检测：需咨询本公司技术人员是否可以定做相关试剂。

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