生物素化的Oligo(dT)特价促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

生物素化的Oligo(dT)特价促销的品牌：百奥莱博，是优质的RNA纯化产品，用于生化科学研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多生物素化的Oligo(dT)等RNA纯化产品请联系我司咨询订购。

名称：生物素化的Oligo(dT)特价促销
英文名：Biotinylated Oligo(dT)
品牌：百奥莱博
编号：BTN130977
本产品是生物素标记的Oligo(dT)，其可与大部分真核生物 mRNA中携带的ploy(A)形成共价杂交偶联实现的，通过生物素和链霉亲和素的亲和作用，实现对mRNA的直接分离，也可用于从总 RNA中进行第二轮纯化mRNA。

储存条件：常温运输及保存、有效期一年。

生物素化的Oligo(dT)特价促销正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：
PY02-087  玫瑰红*琼脂  250克  
5,6-二甲*并咪唑 Kieselguhr 582-60-5
ARB13240 小鼠维生素D3(VD3)含量测试 Mouse vitamin d3,vd3 ELISA KIT
磷酸*喹 Formamidinium acetate 50-63-5
SJ0084 Benzamidine HCl hydrate 苄脒盐*(代"酸")盐水合物
ARB11409 人神经髓鞘蛋白(p2)代做ELISA实验 Human myelin protein 2,p2 ELISA KIT
ARB13895 猪伪狂犬病抗体elisa检测 Porcine anti-prv ELISA KIT
ARB10300 人不透光相关蛋白(OPAs)含量分析 Human opacity-associated proteins,opas ELISA KIT
BL0162 CollagenaseⅠ  胶原酶Ⅰ
ARB12296 大鼠抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)免费代测 Rat anti-thyroid-peroxidase antibody,tpo-ab ELISA KIT
SJ0542 Sepharose CL-2B
CYB162004 兔抗人纤维蛋白原(抗血清) 0.5ml
硫*(代"酸")* 2′-Azido-2′-deoxyuridine 10102-25-7
ARB11732 人富组蛋白(HTN5)尿液中含量检测 Human Histatin 5,htn5 ELISA KIT
SJ0746 小鼠瘤细胞分离液
ARB12026 大鼠β内啡肽受体(β-EPR)定量分析 Rat beta-endorphin receptor,β-epr ELISA KIT
92-31-9 Toluidine Blue 甲**蓝
PY08-033  乳糖胆盐发酵管(双料带导管)  BR10ml  10支/盒，用于大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的测定
ARB10932 人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)ELISA检测服务 Human podo*(代"c")alyxin,pcx ELISA KIT
BL1123 柠檬酸*抗原修复液(50×)
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BTN121122 柱式探针纯化试剂盒 Column Probe Purification Kit
79-06-1 丙*(代"烯")酰胺 Acrylamide
I-卡拉胶 2- Methoxyphenol 9062-07-1
ARB10856 人抗类固醇生成细胞抗体(SCA)ELISA代测服务 Human steroid producing cell autoantibody,sca ELISA KIT
ARB11367 人前列腺分泌蛋白94(PSP94)ELISA检测服务 Human prostate secretory protein94,psp94 ELISA KIT
ARB13221 小鼠晚期糖基化终末产物(AGEs)代做ELISA实验 Mouse advanced glycation end products,ages ELISA KIT
ARB11160 人鱼精蛋白1(PRM1)血清中含量检测 Human protamine 1,prm1 ELISA KIT
SJ0755 *化锰
ARB12636 大鼠雄烯二酮(ASD)检测服务 Rat androstenedione,asd ELISA KIT
CYB163066 BSA-FITC
NF-237 兔抗羊IgG血清
ARB11749 人嗜酸性白血球相关之RNA水解酵素家族成员2(EAR2)Elisa方法检测 Human eosinophIL-associated ribonuclease a family member 2 ELISA KIT
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·长效期SDS-PAGE电泳液(＞30 KD)(干粉)
编号：BTN100912A
英文名称：Stable SDS-PAGE Running Buffer
规格：20L
本产品是专门用于长效SDS-PAGE电泳的缓冲液，加水定容后即可使用，简便快捷。

本产品分A、B两种型号。A型电泳液适合30 KD以上蛋白，B型电泳液适合2-30KD蛋白。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

·包涵体大量纯化试剂盒
编号：BTN90510
英文名称：Inclusion Body Maxiprep Kit
规格：2次
本产品是包涵体微量纯化试剂盒的大提升级产品，用于大量，快速的提取高质量的包涵体。

产品特点：
1.大量提取，1次可处理多达5升的菌液，相当于50次中量提取。
2.适合制备级别的包涵体纯化，需在50mL以上的离心管或离心瓶中完成。
3. 能有效去除包涵体中的细胞壁和细胞膜等非重组蛋白成份，使重组蛋白在包涵体中所占比重达到60%以上。
4. 即可以选择高压裂解法，也可以采用酶学裂解法裂解细菌。
5. 得到的包涵体可以用于重折叠，也可以用于凝胶层析和动物免疫。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	100mL
溶液B	250mL×2
包涵体溶解液	100ml
溶菌酶	100mg
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存(溶菌酶需要-20℃保存，包涵体溶解液可以室温保存)，有效期一年。

自备试剂：如果得到的重组蛋白确有降解则需要自备蛋白酶抑制剂混合物(BTN80808)。

使用方法：

一．细胞沉淀：
1．转移1-5升菌液到干净的、预称重量的塑料离心瓶中。如果离心瓶体积不够大，可以分多次反复离心收集。
2．5000g(相当于Sorvall GSA转头5500rpm)4℃离心15-30分钟，小心弃上清。
3．复称重量，差值就是细菌的湿重。1升的过夜培养的大肠杆菌湿重一般为3克，所以1-5升菌液一般能得到3-15克细菌。注意：后续操作的很多溶液都是按此步得到得细胞湿重添加。
4．细胞沉淀可以立即使用或存放在-80℃待用。

二．细胞裂解(下面两法中选其一)：
 高压破碎法(French Press)+超声法(推荐方法)
1．按每克细菌湿重加入3mL溶液A重悬细胞，可以用玻璃棒搅拌或用Waring捣碎机匀浆(如果细菌湿重超过10克)使细菌悬浮，直到检测不到成块的细胞为止。如有必要，可以加入溶菌酶干粉，使其终浓度为0.2mg/mL。
2．让细胞通过压力为16000-18000 lb/in2的高压细胞破碎仪，收集的细胞裂解液需放冰上。
3．重复上步操作一次或多次，直到绝大部分细菌都被裂解。注意：每次处理后最好在显微镜下检查细菌裂解的比例。
4．将细胞裂解液置于冰浴中，用超声破碎仪满功率下超声处理5分钟，工作状态为50%(开0.5秒，关0.5秒)。此过程中最好将细胞裂解液放冰上并用磁力搅拌器搅拌，否则产生的热量会使包涵体蛋白变性，在纯化中丢失。
 酶法+超声法(在没有高压破碎仪器时首选方法)
1．按每克细菌湿重加入3mL的含溶菌酶的溶液A重悬细胞，可以用玻璃棒搅拌细菌沉淀使之悬浮。
2．在细菌悬浮液中加入溶菌酶干粉，使其终浓度为0.2mg/mL，搅拌混匀后37℃放置30分钟裂解细菌，其间不时需要用玻璃棒混匀。细菌释放出的DNA将使裂解物变得十分粘稠。如果不粘稠，说明裂解不充分，需要继续裂解，否则完整细菌将和包涵体一起沉淀，影响包涵体的纯度。由于处理量大，最好在显微镜下检查细菌是否充分裂解。
3．将细胞裂解液置于冰浴中，用超声破碎仪满功率下超声处理5分钟，工作状态为50%(开0.5秒，关0.5秒)。此过程中最好将细胞裂解液放冰上并用磁力搅拌器搅拌，否则产生的热量会使包涵体蛋白变性，在纯化中丢失。

三．包涵体纯化：
1．将超声处理的细胞裂解液转移到离心瓶中，22000g 4℃下高速离心60分钟(注意：转子不同其对应的离心速度不同)，小心收集上清。上清含有以可溶形式存在的重组蛋白，可以保留作为SDS-PAGE对照样品。
2. 将沉淀(主要由包涵体构成)悬浮在预冷的溶液B中。每克细菌需要5mL溶液B，1升细菌的湿重约3克，大约需要15mL溶液B，用玻璃棒或匀浆器搅拌混匀后室温放置5分钟。
3．22000g 4℃下高速离心30分钟，沉淀将出现三层，最下面的是未彻底破裂的细胞碎片，其上是包涵体，最上层的松软沉淀是细胞壁和细胞外膜。如果处理过程中使用过溶菌酶，则此层较薄。小心收集上清，可以作为包涵体第一次洗涤的对照样品。
4．重复第8-第9步直到上清变清和最上层细胞壁和细胞外膜松软沉淀消失，此过程一般需要重复洗涤2次(共3次洗涤)，小心收集上清作为包涵体第二次洗涤和第三次洗涤的对照样品。本试剂盒提供的溶液B足够一次5升规模的提取洗3次，如需更多溶液B请单独购买。
5．上步得到的沉淀即为包涵体，其中重组蛋白一般占60%重量，其余40%为其他蛋白质。此沉淀可以长期放置在-80℃冰箱待用，也可以直接用于免疫动物制备抗体，还可以直接进入下面得包涵体的溶解步骤。
6．估计重组蛋白的产率：首先需要通过预实验知道重组蛋白的表达水品，如果表达水平为1%，则1克湿重的细菌中将含有1mg重组蛋白质。此法得到的重组蛋白质的回收率一般在75%，即1mg重组蛋白质能得到0.75mg，丢失0.25mg。

四．包涵体的溶解：
1．在室温下，将包涵体溶解液加入到包涵体沉淀中，用枪头充分吹打后漩涡震荡。如果需要将溶解的包涵体直接用于凝胶过滤层析进一步纯化，则按每克原始细胞湿重加入1mL包涵体溶解液，重组蛋白的浓度约为4-5mg/mL；如果需要将溶解的包涵体直接用于蛋白质折叠，则按每克原始细胞湿重加入3mL包涵体溶解液，重组蛋白的浓度约为1-2mg/mL；注意：包涵体溶解液低温放置会产生沉淀，必须45-65℃溶化并混匀后才能使用。
2．室温放置1小时使蛋白质充分溶解。
3．100,000g 4℃离心60分钟(转速需要根据离心机转子的大小换算)，小心收集上清，保留不溶性沉淀。注意：检查离心管能否承受此离心力。SDS-PAGE检查是否大部分重组蛋白都在上清中。如果没有，说明包涵体没有完全溶解，需要用适当增加包涵体溶解液的用量。
4．将上清(溶解的包涵体)分成10-20mL一份，放于塑料离心管中(不要超过离心管容量的70%)置-80℃长期保存或直接用于复性等试验。由于不同的蛋白质有不同的最佳复性条件，需要用户自己摸索。包涵体纯化过程中引入了溶菌酶，在SDS-PAGE分析时可能有额外条带出现。

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