- ¥321 - 2570
- 康朗生物
- 大陆/美国
- KL161-01
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃恒温保存一年
- 保质期：
-20℃恒温保存一年
- 英文名：
ExPfu DNA Polymerase
- 库存：
大量
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 规格：
ml/盒
ExPfu高保真DNA聚合酶是一种基于Pfu改造的混合酶，具有5＇到3＇DNA 聚合酶活性和3＇到5＇的外切酶活性(即校读活性)，能够纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配现象，其保真度约相当于普通Taq DNA Polymerase的35倍，反应速度视模板复杂程度约为2-4 kb/min。对于一般性模板可以保证10 kb的扩增长度。本产品适用于对保真性要求高的DNA长片段的快速扩增，如基因克隆、测序、定点突变、SNP分析等。使用ExPfu高保真DNA聚合酶扩增得到的PCR产物无3’端突出碱基，不可直接用于TA克隆。
【用途】
• 高保真扩增，长片段的快速扩增，如基因克隆、定点突变等。
• 高GC含量、具有二级结构的复杂模板的扩增。
【特点】
• 高保真性：保真性是Taq 的35倍， Pfu 的5倍
• 高效扩增：可扩增10 kb的长片段
• 批次稳定：遵循标准化生产流程，经过严格的质量检测
【产品组分】
| ExPfu DNA Polymerase (1.5 U/μl) | 100 μl |
| 5 × ExPfu Buffer | 1.5 ml |
【保存条件】
-20℃恒温保存一年
【注意事项】
1. 在50μl的反应体系中ExPfu使用量为0.5~1.5U，不要超过2U。
2. ExPfu高保真DNA聚合酶的3’→5’的外切酶活性可降解引物，用酶量过多会导致引物部分或完全降解，电泳检测时产
生弥散带型或无扩增产物。故在反应体系中应先加dNTPs，再加酶，并立即进行PCR反应。
3. ExPfu高保真DNA聚合酶扩增反应时应使用高质量的dNTP（Cat.No.A113-01），不推荐使用dUTP和其它可诱导产生
dUTP或类似物的试剂，通常使用终浓度各为0.2mM的dNTP就可以达到比较好的效果。
4. ExPfu扩增后的PCR产物经过纯化后，可直接与经去磷酸化的平末端目标载体连接，也可先连接到线性平末端克隆载体
上（如EZ-Blunt Blunt-end Ligation Kit， Cat.No.T170-01），再经亚克隆转移至目标载体。如果需要与线性T载体连接，应
先纯化再对PCR产物的3’端添加A碱基，加A反应可使用EZ-T™ A-Tailing Kit（ Cat.No.T173-01）。
【质量控制】
• 以λ DNA为模板，可以有效扩增10 kb的DNA片段
• 以基因组DNA为模板，可以有效扩增单拷贝基因
• 无内切酶、外切酶污染
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文献和实验We report a simple homogeneous fluorescence assay for quantification of DNA polymerase function in high throughput. The fluorescence signal is generated by the DNA polymerase triggering opening of a molecular beacon extension of the template
The Polymerase Chain Reaction (PCR)
. Did He Really Invent PCR? • The basic principle of replicating a piece of DNA using two primers had already been described by Gobind Khorana in 1971:– Kleppe et al. (1971) J. Mol. Biol. 56, 341-346. • Progress was limited by primer synthesis and polymerase
能催化从四种5′-脱氧核苷三磷酸游离出焦磷酸而使DNA进行聚合反应的酶。EC2.7.7.7.。必须以DNA为模板，合成的DNA与模板具有互补的碱基排列（碱基互补性）。是与DNA复制和修复有关的重要的酶，虽可从许多组织分离出来，但对大肠杆菌的这种酶的研究较为先进。康伯格（A.Kornberg，1958）最初从大肠杆菌将此酶纯化，并弄清了其结构和特异性，但以后经过分子遗传学的研究，已明确了这种酶主要与DNA修复有关。因此重新进行与DNA复制有关酶的检索，发现两种新的酶。康伯格最初发现的酶称为
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