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- 详细信息
- 文献和实验
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99
- 供应商:
诺博莱德
- 规格:
2×200ml/KIT
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文献和实验多篇 SCI 发现用 RIPA 提蛋白存在问题,我们该如何应对?
这篇综述重点说明使用 RIPA 裂解液提取总蛋白以及下游实验中可能存在的问题。RIPA 裂解液常用于从脊椎动物细胞和组织中提取总蛋白 [1]。但是由于蛋白质间有较大的差异和非蛋白成份的干扰,所以从一个样本中同时释放和溶解所有蛋白质是非常困难的。特别是一些整合到膜上的蛋白质,或与其他蛋白质 / 核酸形成复合物时,就大大阻碍了提取效率。因此可以推断,蛋白质在提取过程中或多或少的与在体内时真实情况不尽相同。经典 RIPA 裂解液中含有低浓度的十二烷基硫酸钠(SDS 变性剂),脱氧胆酸(干扰蛋白质间
。具体方法是:手术或活检获得的组织立即用液氮冷冻,或用OCT复合物包埋后再放入液氮中,便于切片,Cryostat冰冻切片后室温下风干,用4 ℃ 纯乙醇或丙酮固定10min,PBS冲洗后即可进行免疫细胞化学染色。 (3)染色方法的选择:因抗原较微量,而且位于细胞膜,应采取敏感性强、特异性高、非特异性着色少的方法。虽然有报道采用间接荧光或间接酶标技术也能显示特异性T淋巴细胞,我们推荐最好采用PAP或ABC染色技术。具体方法参阅第三,四章 。 2.粘膜分离液中
。具体方法是:手术或活检获得的组织立即用液氮冷冻,或用OCT复合物包埋后再放入液氮中,便于切片,Cryostat冰冻切片后室温下风干,用4 ℃ 纯乙醇或丙酮固定10min,PBS冲洗后即可进行免疫细胞化学染色。 (3)染色方法的选择:因抗原较微量,而且位于细胞膜,应采取敏感性强、特异性高、非特异性着色少的方法。虽然有报道采用间接荧光或间接酶标技术也能显示特异性T淋巴细胞,我们推荐最好采用PAP或ABC染色技术。具体方法参阅第三,四章 。 2.粘膜分离液中
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