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99
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诺博莱德
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200ml/KIT
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文献和实验ELISPOT检测,最好采用新鲜血液。在保证无菌操作的前提下,首先应保证取血时抗凝剂应及时充分的与血液混匀,避免血凝块的出现。抗凝血最好及时提取PBMC,避免放置时间过长,室温下避免过夜。应选用分离效果好的淋巴细胞分离液,避免PBMC中混有过多其他细胞成分或杂质。 2. 在分离外周血淋巴细胞时,发生了溶血,会影响我的试验结果吗? 答:外周血出现溶血后,在使用淋巴细胞分离液分离PBMC时,溶血产生的细胞碎片、血红素等杂质将极大可能悬浮
10分钟。将会看到血液分为2层,上层是淡黄色的血浆,约占60%。2、用巴士滴管或吸管将上层血浆吸出,还剩约1ml血细胞层,在血细胞层中加入1:1体积,即约1ml的灭菌生理盐水,混匀,见图2。 图2 在血细胞中加入生理盐水充分混匀 3、以下是把12ml生理盐水与血细胞混合物(相当于12ml全血)合并成一管后分离白细胞过程。将24 mL淋巴细胞分离液(是全血体积的2倍)预先加入灭菌的50 mL 离心管中。将与生理盐水混合的血细胞缓慢加入淋巴细胞分离液液面上,注意尽量不要让血细胞层掺入到淋巴细胞分离液
实验步骤:1、EB病毒液的制备复苏B95.8细胞株,使用培养基为10% FCS RPMI-1640逐步添加培养基至细胞长至对数生长期细胞计数,调节细胞数量为1×10^6个/ml在CO2培养箱中继续续培养10天,中间不换液至第10天收集培养上清,1800rpm,4℃离心15分钟0.22μm滤器过滤,1ml/支分装,冻存于液氮备用2、病人外周血液的采集、分离使用枸橼酸钠抗凝管采集恢复期病人外周血10ml,尽量在24h内进行分离平衡盐(BSS, balanced salt solution)溶液
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