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- 2025年07月16日
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BestBio贝博
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500T/1000T
贝博® BBcellProbe® 活细菌/死细菌染色试剂盒是采用BBcellProbe® N01/PI绿色-红色荧光探针双染细菌的方法染色活细菌和死细菌。 细菌细胞活性取决于其代谢特征或膜完整性。但是依赖于代谢特征的检测方法通常只适用于部分细胞类型。评估细胞膜完整性的方法具有更高的灵敏度和更普遍的适用性。 贝博® BBcellProbe® 活细菌/死细菌染色试剂盒利用细菌细胞膜的完整性差异，可以可靠地进行染色并在几分钟内定量区分活细菌和死细菌。 本试剂盒中的BBcellProbe® N01活细菌染色探针为绿色荧光标记的活细菌探针，能透过活细菌的完整结构的质膜，具有500 / 525nm的最大激发/发射波长。膜受损的死细菌染色探针为PI，是一种红色荧光核酸染色剂，只能穿透膜受损的死细菌。具有完整细胞膜的细菌将被荧光染料染成明亮的绿色，而膜受损的细菌表现出较少的绿色荧光，会发出较强的红色荧光。 当膜通透性的绿色荧光探针N01进入细菌后，跟细菌的核酸结合。染色探针N01在进入细胞膜之前荧光较弱，当与活细菌的DNA结合后其荧光强度大大增强，被激发后可以发出绿色的荧光，具有很高的淬灭常数和激发态寿命。单独使用N01染料时可以染色所有细菌，包括膜结构完整的细菌和膜受损的细菌。 红色核染色染PI不能穿过活细菌的完整细胞膜，它仅穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞，并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光(激发：488，545nm，发射：617 nm)，因此PI仅对膜受损的死细胞染色。 根据以上特点，BBcellProbe® N01和PI可以被结合用来作为活细菌和死细菌的双重染色。由于BBcellProbe® N01-DNA和PI-DNA都可被488 nm激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。 本试剂盒是利用活死细菌的膜通透性改变进行的检测，适用于荧光显微镜和流式细胞仪。本测定原理适用于大多数细菌类型，包括各种革兰氏阳性和革兰氏阴性菌。细菌活力的常见标准是细菌在合适的营养培养基中繁殖的能力生长测定，使用本试剂盒产生的结果与液体或固体培养基中的生长检测相关性良好。但是需要注意，不同于动物细胞，在一定的条件下，具有损伤膜的细菌可能能够恢复和繁殖，这种细菌可以在本试剂盒的测定中被检测为“死亡”。相反，一些膜完整的细菌可能无法在营养培养基中繁殖，然而这些细菌可能被记为在这个测定中被检测为“活着”。如果在该测定法和细菌之间观察到相当大的差异，应该考虑这些可能性。 以每个样本100 μl染色液计，本试剂盒小包装可以染色500个样本。 荧光探针N01除了最简单的细菌核荧光标记外，还可以用于荧光成像，微孔板分析和流式细胞术。在合适的滤光器下，这种DNA结合染料与其他颜色的荧光染料一起可用于活细菌的多种颜色分析。
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文献和实验染色工作液的配制：
根据样品数按下列比例配制染色工作液。
用37℃培养箱预热0.85% NaCl溶液将BBcellProbe® N01荧光染料进行500倍稀释，将PI进行100-500倍稀释，配制成染色工作液。
例如：
每10ml 0.85% NaCl溶液中加入20 μl染色液A，充分混匀，即成染色工作液A。
每10ml 0.85% NaCl溶液中加入20-100 μl染色液B，充分混匀，即成染色工作液B。
细菌染色：
1. 收集样本细菌，用0.85% NaCl溶液洗涤细胞3次。
2. 用100 μl-200 μl染色工作液将细菌重悬。
3. 在室温避光孵育15分钟。
4. 用0.85% NaCl溶液洗涤细菌一次。
5. 用适量0.85% NaCl溶液重悬细菌。
6. 将5 μl菌液滴加到载玻片，盖上盖玻片，油镜观察。
7. 用荧光显微镜观察。激发波长为488nm，最大发射波长为525nm和617nm。
结果分析 ：
可以在Ex / Em = 488 / 525nm（FITC滤光器组）和540 / 620nm（TRITC滤光器组）下荧光测量染色细胞，分别用于活细菌和死细菌。
荧光显微镜下，使用490±10nm波长激发，活细菌为黄绿色，死细菌为红色。
用545 nm波长激发，仅能够看到红色的死细菌。
稀 释液 10min，封闭内源性 POD 用正常抗绵羊血清封闭 用含 3% BSA 的 PBS 封闭 20min 减少转化溶液浓度 50% 支原体检测试剂盒 双染，e.g.用 Annexin-V-Fluos 注 意 ： Measuring via microplate reader not possible because of too high background. TUNEL 反应 转化步骤 核酸酶 某些组织（e.g. 平滑肌，组织
形成单个细胞悬液是本检测方法的关键。如组织难以消化，可加入适量胶原酶。另外，消化前，用剪刀将组织剪成小块也不要忘了。2、细胞可尽量的多准备（at least 100 thousand），这样流式检测方便，结果可靠。3、每次消化的时间等条件应尽量一致，否则使实验结果CV值偏大。4、细胞用乙醇固定后可以访置48小时（4度保存）后检测，便于无法立即检测的实验者，对实验结果基本没有影响。其它也有一些检测凋亡的方法，均有商品化试剂盒。在此不赘述。yanzishenyang：我看相关的说明：碘化丙啶（propidium
干细胞植活最低数量要求是 2-5 x 106/ 公斤体重。然而正常人外周血中干细胞数量只占所有有核细胞的 0.1% 。很明显这些数量的干细胞是不足够运用于移植的，除非使用恰当技术增加外周血干细胞的含量供采集。此技术可通过给予供者集落刺激因子（通常是粒或粒 - 单集落刺激因子），同时可联合骨髓抑制剂（如环磷酰胺）的方法动员造血干细胞进入循环外周血中。联合使用化疗药物与集落刺激因子造成短暂的循环血中髓系细胞抑制，随后使骨髓代偿性地释放髓祖细胞、造血干细胞至外周血，从而达到动员干细胞的目的。联合使用细胞
