- ￥1800
- 上海一基
- 上海
- YJ70003223
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温
- 规格：
盒
本试剂盒利用双抗体夹心法鉴定小鼠淋巴细胞杂交瘤培养上清中单克隆抗体或特异亲和纯化单克隆抗体的类和亚类（可区分出IgG1\IgG2a\IgG2b\IgG3\IgM\IgA）。采用小鼠抗体共有位点的二抗包 被微孔板，与加入的培养上清中的小鼠抗体结合，再加入HRP标记的抗小鼠各类、亚类的抗体来分别反应， 随后用TMB底物系统显色并用稀硫酸终止，再通过酶标仪检测吸光度来判断被测单克隆抗体的类或亚类。本 试剂盒具有极高的分辨率，是您鉴定小鼠单克隆抗体类、亚类的可靠工具。
二、试剂组份：
酶标板 含自封袋2个
2ⅹ96孔
标本稀释液
15ml
通用阳性对照
1.5ml
显色剂A
15ml
通用阴性对照
1.5ml
显色剂B
15ml
酶标二抗 6种
6×4ml
反应终止液
15ml
20×清洗液
50mL
加样图
2份
封板膜
4张
说明书
1份
三、使用范围：用于培养上清中小鼠单克隆抗体Ig类、亚类的鉴定以及相关内容的研究。
四、使用方法：
1、首先将试剂盒恢复室温（大约30分），然后用纯水把清洗液配成工作浓度（一份浓缩清洗液加19份纯水）。
2、取出酶标板。每个标本需要6孔，阳性对照6孔，阴性对照6孔。多余的用自封袋保存，记得放入干燥剂。
3、将标本检测孔每孔先加入标本稀释液各50μl。然后将50μl细胞培养上清（或特异亲和纯化的抗体）再加入酶标微 孔板，每个标本加6孔；阳性对照和阴性对照各6孔每孔100μl此处不加标本稀释液。贴上封板膜37℃温育30分钟。
4、弃去板内液体，手工洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干（或机洗5遍）。再在每个标本的6孔中分别加入6种酶标二抗各100μl，通用阳性、阴性对照的各孔也一样。在加样图上或酶标板上做好标记。贴上封板膜37℃温育30分钟。
5、吸弃板内液体，手工洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干（或机洗5遍）。每孔分别加入显色剂A和显色剂B各50μl，换一张新的封板膜贴板避光37℃显色20分钟。
6、本试剂盒特异性好一般肉眼即可观察出结果，看显色蓝的那个孔所对应的酶标二抗就知道此标本的Ig类或亚类。更可将反应终止液（每孔50μl）终止反应后用酶标仪450nm测定波长，630nm参考波长双波长测定结果，参看高值孔所对应的酶标二抗就知道此标本的Ig类或亚类(阳性对照OD一般不小于0.8，阴性对照一般不高于0.15，阳性判定标准：样品OD大于阴性OD+0.15，阴性OD低于0.05按0.05算)。
五、产品特点：高灵敏度、高特异性、结果容易判定。
六、保存条件：不开启2-8℃避光保存效期一年。不正确存放或过于频繁开启使用有可能因此使效期缩短。
七、注意事项：
1、虽然本试剂盒过期后很久还有使用价值但还是请您在标签注明的有效期内使用。
2、在检测腹水类单抗时要稀释到1/5万，虽然可以分辨但并不建议您这样做。此类样品成分十分复杂，有干扰结果的可能。在此种情况下您可以选择 的鉴定试剂。它会给您带来满意的结果,同时您也可以使用抗原包被板替换试剂盒内的包被板来解决此类问题，但这种情况下阳性对照不显色属于正常。
3、手洗板子时一定要把孔加满，停留10秒然后弃尽，甩干净。特别是在酶标二抗温育后洗板时一定要把酶吸出而不是甩出，要吸净且吸头每孔要更换不能重复使用。这个在手工洗板时对结果很重要。
4、一次没用完的板子要带干燥剂放自封袋封好，随盒存放。
5、拿放板子时不要剧烈抖动，以免孔间交叉污染出现错误结果。
6、本试剂一般不会出现两个阳性，但出现两个阳性的现象现实中是真实存在的，一般会一个OD很高,另一个很低但却还能判为阳性，实验分析表明这种情况下以OD高值孔为准，出现这种情况有多重原因：A、培养的细胞中有“饲养细胞”残留，B、由于单抗研制存在人工干预步骤因此抗体本身有可能会存在亚类结构上的轻微变异， C、样品为非特异亲和纯化的抗体或样品是腹水，D、上清出现少量污染，E、实验操作粗放，F、加错试剂。
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文献和实验抗体的检测外，还应该用与其抗原成分相关的其它抗原进行交叉试验，方法可用ELISA、IFA法。例如：①制备抗黑色素瘤细胞的McAb，除用黑色素瘤细胞反应外，还应该用其它脏器的肿瘤细胞和正常细胞进行交叉反应，以便挑选肿瘤特异性或肿瘤相关抗原的单克隆抗体。②制备抗重组的细胞因子的单克隆抗体，应首先考虑是否与表达菌株的蛋白有交叉反应，其次是与其它细胞因子间有无交叉。 2．McAb的Ig类与亚类的鉴定 一般在用酶标或荧光素标记的第二抗体进行筛选时已经基本上确定了抗体的Ig类型
有明显的克隆生长，取上清用间接ELISA法重复筛选后，克隆化，获3株阳性细胞。将培养上清液浓缩后进行亚类鉴定，3株细胞系皆为IgG1，染色体计数结果为80～110(每细胞系统计10个细胞)，杂交瘤细胞染色体数均超过其亲本染色体数，为二者之和。 2.2 单克隆抗体的纯化：小鼠腹水中除含有单抗外，还含有清蛋白、小鼠自身Ig及其他血清蛋白、脂肪，故纯化腹水中的单抗十分必要。我们采用辛酸法［见：叶群瑞.一种简便、快速、量大的辛酸纯化单抗法.生物化学与生物物理进展，1991；18(1)：60］
及酶标抗体结合，而不再形成"夹心复合物"。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象，此时反应后显色的吸光值（位于抗原过剩带上）与标准曲线（位于抗体过剩带上）某一抗原浓度的吸光值相同，如按常法测读，所得结果将低于实际的含量，这种现象被称为钩状效应（hook effect），因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时，反应甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）时，应注意可测范围的最高值。用高亲和力的单克隆抗体制备此类
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