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两管式 RT-PCR 试剂盒 (MMLV-Taq)50 次说

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      两管式 RT-PCR 试剂盒 (MMLV-Taq)50 次说明书

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      上海一研

    两管式 RT-PCR 试剂盒 (MMLV-Taq)50 次说明书注意事项:
    1.从少量样品(1-10mg组织或102-104细胞)中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品,沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来,糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成,也不影响PCR反应。
    2.匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。
    3.分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机,2600×g离心30-60分钟。
    两管式 RT-PCR 试剂盒 (MMLV-Taq)50 次说明书详细介绍:
    产品细节图片1
    两管式 RT-PCR 试剂盒 (MMLV-Taq)50 次说明书技术优势
    1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
    2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并最大限度的降低RNA污染。
    3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
    4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
    5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。
    两管式 RT-PCR 试剂盒 (MMLV-Taq)50 次说明书操作步骤:
    1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
    b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
    c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
    2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
    3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
    5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
    6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
    7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
    8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
    9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
    10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。

    5-trans U-46619 (1 mg)    9,11-dideoxy-9。alpha。,11。alpha。-methanoepoxy-prosta-5E,13E-dien-1-oic acid; 5,6-trans U-46619; 5-trans U-46619
    15(S)-Fluprostenol (10 mg)    9α,11α,15S-trihydroxy-16-(3-(trifluoromethyl)phenoxy)-17,18,19,20-tetranor-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid; 15(S)-Fluprostenol
    YM-53601 (1 mg)    2-[(2E)-2-(1-azabicyclo[2。2。2]oct-3-ylidene)-2-fluoroethoxy]-9H-carbazole, monohydrochloride; YM-53601
    Leukotriene B4 (100 ug)    5S,12R-dihydroxy-6Z,8E,10E,14Z-eicosatetraenoic acid; LTB4; Leukotriene B4
    11-dehydro Thromboxane B2-d4 (100 ug)    9。alpha。,15S-dihydroxy-11-oxothromba-5Z,13E-dien-1-oic-3,3,4,4-d4 acid; 11-keto TXB2-d4; 11-dehydro Thromboxane B2-d4
    5(S),15(S)-DiHETE (25 ug)    5S,15S-dihydroxy-6E,8Z,10Z,13E-eicosatetraenoic acid; 5(S),15(S)-DiHETE
    Precoated (Mouse Anti-Rabbit IgG) EIA 96-Well Solid Plate (5 ea)    Precoated (Mouse Anti-Rabbit IgG) EIA 96-Well Solid Plate
    Corticosterone EIA Antiserum (500 dtn)    Corticosterone EIA Antiserum
    15(S)-HpEPE (50 ug)    15S-hydroperoxy-5Z,8Z,11Z,13E,17Z-eicosapentaenoic acid; 15(S)-HpEPE
    9(S)-HpODE (1 mg)    9S-hydroperoxy-10E,12Z-octadecadienoic acid; 9(S)-HpODE
    HEPES Stock Solution (1 M) (500 mL)    HEPES Stock Solution (1 M)
    PAF C-16 (50 mg)    1-O-hexadecyl-2-O-acetyl-sn-glyceryl-3-phosphorylcholine; Platelet-activating Factor C-16; PAF C-16
    2-Linoleoyl Glycerol (5 mg)    9Z,12Z-octadecadienoic acid, 2-glyceryl ester; 2-LG; 2-Linoleoyl Glycerol
    PtdIns-(5)-P1 (1,2-dipalmitoyl) (ammonium salt) (1 mg)    1-(1,2-dihexadecanoylphosphatidyl)inositol-5-phosphate, diammonium salt; DPPI-5-P1; PtdIns-(5)-P1 (1,2-dipalmitoyl) (ammonium salt)
    Uric Acid Standard (1 ea)    Uric Acid Standard
    Sucrose Developing Enzyme (1 ea)    Sucrose Developing Enzyme
    TMPD (hydrochloride) (5 g)    N,N,N’,N’-tetramethyl-1,4-benzenediamine, dihydrochloride; Wurster’s Reagent|N,N,N’,N’-Tetramethyl-p-Phenylenediamine; TMPD (hydrochloride)
    U-75302 (100 ug)    6-(6-(3R-hydroxy-1E,5Z-undecadien-1-yl)-2-pyridinyl)-1,5S-hexanediol; U-75302
    T0901317 (5 mg)    N-(2,2,2-trifluoroethyl)-N-[4-[2,2,2-trifluoro-1-hydroxy-1-(trifluoromethyl)ethyl]phenyl]-benzenesulfonamide; T0901317人吡啶酚(PYD)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
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    人鼻咽癌(NPC)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
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    人苯并吡-DNA(PAH-DNA)ELISA试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
    人诺龙/去(NP)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
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    人胞浆免疫球(CIg)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
    两管式 RT-PCR 试剂盒 (MMLV-Taq)50 次说明书人包虫抗体IgG ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
    人膀胱肿瘤抗原(BTA)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
    人膀胱癌抗原(UBC)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
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    人半胱氨酶抑制剂/胱抑素C(Cys-C)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
    人瘢痕性天疱疮抗体(CP)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
    人百日咳毒素(PT)ELISA 试剂盒96T/48T试剂盒组装/原装
    两管式 RT-PCR 试剂盒 (MMLV-Taq)50 次说明书公司的RNA/DNA提取目录有下面10个系列,5000余种产品
    1、RNA纯化系列产品
    2、DNA纯化系列产品
    3、电泳及回收系列产品
    4、探针标记及检测系列产品
    5、核酸扩增系列产品
    6、克隆表达系列产品
    7、基因组研究系列产品
    8、蛋白质研究系列产品
    9、细胞生物学研究系列产品
    10、即用型溶液、质粒库、菌种库等等

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