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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
50-100万个细胞
- 供应商:
KALANG
- 品系:
细胞系
- 组织来源:
其他
- 物种来源:
其他
- 细胞形态:
上皮细胞样,贴壁生长
- 器官来源:
非洲绿猴正常肾
- 运输方式:
常温或干冰运输
- 年限:
无限
- 生长状态:
上皮细胞样,贴壁生长
- 规格:
50-100万个细胞
1) 来源:非洲绿猴正常肾
2) 形态:上皮细胞样,贴壁生长
3) 含量:>1x106 个/mL
4) 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
| 中文名称 | 非洲绿猴肾细胞 |
| 英文名称 | African Green Monkey Kidney Cell |
| 规格 | 1*10 6/ T25瓶 |
可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式
(1)干冰运输,收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏;
(2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
(3)收到细胞后请拍照,3天内如果发现污染,请及时拍照与我们联系。
细胞用途:仅供科研使用。
VERO Cells接受后的处理
1) 收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。
2) 请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3) 弃去T25瓶中的培养基,添加6ml新的完全培养基。
4) 如果细胞长满(90%以上)请及时进行细胞传代。
5) 接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。
VERO Cells培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备
1) 准备MCCOY'S 5A培养基;北美胎牛血清,10%;双抗1%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二. 细胞处理
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入250px皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。
下面T25瓶为例;
1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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文献和实验vero(非洲绿猴肾cell):贴壁细胞,以25ml小方瓶为例,培养液用的是MEM。 MEM的配制:10%小牛血清,1%双抗,3%谷氨酰胺,1~1.5%NaHCO3. 传代方法: 1、倒掉培养液,如果细胞脏的话可用PBS洗两次,否则不用。 2.、胰酶0.25%2ml消化1~3分钟,容易消化. 3、倒掉胰酶,加MEM9~12ml,将贴壁细胞摇至悬浮,并用吸管吹匀,一传三或一传四。 4、置37度,5%CO2孵箱。
传代步骤比较传统:倒掉培养液->PBS洗2遍->胰酶0.25%消化->倒掉胰酶->加培养基->用吸管吹打均匀->分瓶->放置37度,5%CO2孵箱。我的体会是:1、消化时间和实验环境温度也有很大关系,我们实验室条件比较差,不能维持恒温(不过我想大部分实验室目前也还是做不到的)。夏天的时候,消化特别快。但是到了冬天,就很慢,要用手捂老半天。2、消化到什么程度可以,经验很重要,如果每瓶消化都要通过显微镜观察来判断,首先效率太低,而且还很容易消化过头。对光观察培养瓶,当感觉到有些泛白,瓶角有少许细胞
2 is composed of a diverse and heterogeneous group of subtypes with differential cytotoxicities in mammalian cells. In this chapter, we describe the use of the Vero-d2EGFP fluorescent assay to examine the relative toxicities of Stx2 and Stx2 subtypes expressed
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