辣根过氧化物酶(HRP)标记套装价格厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖辣根过氧化物酶(HRP)标记套装价格厂家在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：辣根过氧化物酶(HRP)标记套装价格厂家
编号：XH087
品牌：百奥莱博
规格：一套
保存条件：HRP（辣根过氧化物酶）-20度保存，透析袋2－8度处理。其他常温保存。
产品说明：本套装是将HRP标记的常用试剂集合为一体而成。本操作流程为经碘的高碘酸氧化法。适合于蛋白等含有*基物质的标记。特别是抗体的标记。
如果待标记物分子量太小（如小于15KD），可能会穿过透析袋而造成样品损失。
标记原理：在低PH下使RP经NaIO４氧化后形成的醛基可蛋白等分子的*基相连，形成斯夫氏硷，后者可进一步用NaBH４还原生成稳定的酶标记物。
操作方法：
一， 标记量的计算：HRP（辣根过氧化物酶）分子量为40KD左右。一般为HRP：待标记物＝2：1到4：1之间。比如抗体IgG分子量一般为150－160KD。则10mg HRP可标记抗体在10mg-20mg之间。
二， 计算好各步反应时间。作好开始标记的准备工作，最好是从下午开始。将HRP（辣根过氧化物酶）一共10mg加入1ml双蒸水溶解。溶解后可放－20度存放一个月。如果想作两次标记，可适当称量5mg。但并不推荐称量更小的质量。以免产生更大误差。而且透析袋一般也只够两次用量。
三， 剪切合适长度透析袋，用双蒸水清洗三次备用。透析袋分宽窄两种，适合于不同量样品的透析，请自己安排。称取21.3mg NaIO４，加入0.5ml双蒸水溶解(现配现用，浓度为0.2M)，将100mM乙酸*（PH4.4）用双蒸水稀释100倍成1mM乙酸*（PH4.4）。准备待标记物，如果待标记物本身盐含量很低并且缓冲力差，如生理盐水，可等二天再准备。如果不确定，将0.2M PH9.5 CB稀释20倍（请不要一次稀释完，留1－2ml左右备用），作为透析液，将待标记物装入透析袋中4℃透析过夜，透析袋适当留长约2ml体积的量以备第二天加入酶（透析袋使用请见附录）。
四， 以一次标记完为例，如果标记量小，可按比例减小试剂的用量。取0.2ml现配的NaIO４溶液加入HRP溶液中，混匀，避光常温反应两小时。装入透析袋中，在稀释过的乙酸*（PH4.4）溶液中4℃透析过夜（透析袋使用请见附录）。
五， 第二天早上，如果样品为固体，可用水溶解，加入1/20体积的0.2M PH9.5 CB，混匀。取出活化好的HRP装入一适合离心管中，加入50ul 0.2M PH9.5 CB，混匀，立刻加入待标记物中，混匀。避光常温反应两小时。
六， 加0.1ml新配的10mg／ml NaBH４液，混匀，常温半小时。
七， 配制合适的透析液，如生理盐水或者PBS等。透析酶标记物。
八， 如果有条件进一步纯化，可透析半天后去进一步纯化，如果不纯化，请在4℃透析至少24小时。勤换液。

附透析袋使用方法：
本透析袋已预处理过，用双蒸水清洗后将水用适当吸一下。就可直接使用。透析袋上下都可以用铁夹，但如果铁夹不够用，下部可用细线或者其他的透析袋夹。
将透析袋轻轻的折上两到三折。用线或者透析袋夹封住，上面支开，加入待透析物，留一定量的空气在顶上，并小心的折一折，用铁夹夹住，轻轻的挤压，如没发现有液体流出，可放入透析液中。一般透析可用纯净水瓶去顶使用。用一次性筷子或者其他合适物穿过铁夹，将透析袋吊在透析液中，补充透析液，使透析液盖过透析袋中的液面而不要淹过铁夹下面。

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·SYBR Green II(10000×)
编号：XH026
规格：100ul
SYBR Green II RNA染料是一种高敏感的核酸染色试剂，可以对RNA或者是单链的DNA进行染色。使用300nm透射光显影的情况下，非变性凝胶中检测核酸的灵敏度可以达到5×10-7克。与传统的EB染料相比SYBR Green II RNA染料的灵敏度更高，可以应用于杂交前RNA质量的检测，同时不会影响后续的转膜，还可应用于变形梯度凝胶电泳（DGGE）和单链构象多态性分析（SSCP）等实验。SYBR Green II RNA染料可以代替银染和EB染色，消除了银染复杂、费时的缺点；与EB染色相比，形成的SRBR Green II -RNA复合物所激发的荧光是EB-RNA复合物激发荧光的7倍。SYBR Green II RNA染料并不是特异性的结合RNA或者DNA单链，但是其对单链的结合效率是双链的约2倍，广泛的应用于RNA的质量分析中。
染色方法：
SYBR Green II RNA 染料检测核酸时即可预染也可以电泳后再进行染色。做预染使用时，取1ul贮存液加入1ml TE缓冲液或者灭菌双蒸水中混匀，再加入1ml 的6-loading buffer上样缓冲液混匀（此时溶液为1：2000稀释，即为工作液）电泳时取1-2ul工作液和5ul电泳样品混匀后直接上样。注意：须将商品化的核酸MARKER作一定倍数的稀释（1/5-1/10），这样才能得到比较理想的结果。
电泳后染色。电泳后，在室温、避光的情况之下准备染色液。染色液要在塑料器皿中制备而不要在玻璃器皿中，因为玻璃表层对该试剂有吸附作用。
染料取出后室温放置，恢复室温后简单离心混匀。
染色液使用1×TBE缓冲液进行1：10，000稀释。如果是琼脂糖甲醛变性胶，用1×TBE做1：5，000的稀释。由于SYBR Green II RNA染色液灵敏度高，所以要选用新鲜的1×TBE缓冲液进行稀释，以免缓冲液中残存的杂质产生背景，影响实验结果。注意：为了提高染色的灵敏度，要确定缓冲液的PH值在7.5和8之间，因为SYBR Green II RNA染色液对PH敏感。
把胶放在塑料的染色容器中，加入足够染色液使之覆盖整块胶。用铝箔遮盖或者是放在暗处避光。在染色之前没有必要先将胶中的变性剂如尿素和甲醛洗出来，因为SYBR Green II RNA染色液复合物发出的荧光在甲醛或者尿素存在时不会猝灭。
在室温下轻轻摇晃凝胶。聚丙*(代"烯")酰胺凝胶的最佳染色时间是10-40分钟，琼脂糖凝胶的最佳染色时间是20-40分钟。染色时间也可能随着凝胶的厚度和浓度变化。由于其荧光本底很低，凝胶染色后无需脱色。染色工作放在2-8°C避光保存，可以重复使用3-4次。注意：SYBR Green II RNA染色液不影响RNA向膜上的转移和northern中的后续实验。
染色胶显色和成像：SYBR Green II RNA染色液复合物所激发的荧光可以使用300nm和254nm光波照射，通过Wratten 15 滤光片检测。注意：由于荧光本底较低，所以可以通过适当延长曝光时间的方法检测痕量的核酸。
请带手套操作。
贮存
SYBR Green II RNA染色液保存于DMSO溶液中，此贮存液于保存温度为-20°C，放置于避光干燥器中，在以上条件下，可在保存一年。稀释工作液在2-8°C可以放置一周，在室温放置3-4天。

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