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- HZbscience
- 中国/美国
- HZ-MSP-8
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月
- 保质期：
12个月
- 英文名：
Recombinant Macrophage Stimulating Protein (MSP)
- 库存：
20
- 供应商：
沪震生物
- 规格：
盒
英文名称：Recombinant Macrophage Stimulating Protein (MSP)
英文简称：MST1; HGFL; NF15S2; Hepatocyte Growth Factor-Like Protein; Macrophage Stimulating 1
物种：(Human，人)；(Mouse，小鼠)； (Rat，大鼠)等其它种属。
来源：原核表达
宿主：E.coli
性状：冻干粉
规格：10µg/50µg/200µg/1mg/1g
储存：避免反复冻融。2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月。
应用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
如果需要有生物活性的蛋白，请参见活性蛋白。
MSP重组蛋白不同的系统步骤稍微有些不同的，大致步骤如下：
真核表达系统的重组蛋白表达步骤：
| a. | 选择表达载体和宿主细胞（常用的CHO和HEK293） |
| b. | 表达载体的构建 |
| c. | 无内毒素的质粒抽提 |
| d. | 细胞瞬时转染 |
| e. | 表达小试，条件优化 |
| f. | 表达分析和鉴定（SDS-PGAE和WB） |
| g. | 大量表达 |
| h. | 亲和纯化 |
| i. | 检测和鉴定 |
| a. | 选择表达载体 |
| b. | 密码子优化 |
| c. | 基因合成/亚克隆 |
| d. | 转化表达菌株 |
| e. | 蛋白表达小试分析 |
| f. | 如果蛋白可溶，蛋白亲和纯化 |
| g. | 如果蛋白不可溶，则需要变复性来制备可溶蛋白。 |
| h. | 鉴定，包括SDS-PAGE和WB鉴定 |
在重组DNA技术的发展早期，人们认为在基因的前面有一个强启动子和一个起始密码子就足以在大肠杆菌中获得很好的表达。随后，认识到获得有效的翻译所需的条件要复杂得多，MSP重组蛋白除了要有强启动子和起始密码子外，良好的表达尚需编码目的蛋白的mRNA中含有核糖体结合位点，表达水平受密码子喜好程度的影响，也受编码序列中其他目前尚未明了的因素影响。通过改变起始密码子前端的序列，或者在不改变蛋白质序列的条件下利用密码子的简并性改变5’末端编码序列往往有助于解决问题。
通常，两个基因之间的融合表达能更快地解决这些问题。在这种方式中，目的基因被引入某个高表达蛋白序列（fusion tag）的3’末端，比如大肠杆菌的一段序列，或者任一可在大肠杆菌中高度表达的基因，它提供良好表达所必需的信号，而表达出的融合蛋白的N末端含有由fusion tag编码的片段。fusion tag所编码的可能是整个功能蛋白或是其中的部分。比如6x His Tag、β-半乳糖苷酶融合蛋白和trpE融合蛋白、谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白以及硫氧还蛋白(Trx)融合蛋白等。
H+： 原始的菌株，表达量比较低。
1A1，2D4...3D2，3D8：通过SDS-PAGE鉴定的几个高表达菌株，表达量明显提高。后面的测序结果表明，3D2和3D8的序列一模一样。
MSP重组蛋白展示的就是H+和3D8的5'端DNA序列的比对：
红框标记的是两条序列不一样的地方，怎么样？就变了几个碱基的序列，表达量就千差万别。这样的例子太多，值得一试！
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文献和实验sunside 大家好，现在刚开始查这方面的资料。有很多疑问。 想问一下做过或在做这方面研究的前辈，请多多指教。 1.我想做血液样本的MSP，大概100个样本的话试剂大约需要多少费用？ 2.请教各位前辈，一般大家单纯做MSP的话，周期多长？因为快毕业了，所以担心较难的话，可能做不完。 zjubell 这个不难的，完全可以自己做。 你要测几个位点的甲基化，1个跟50个位点，价格肯定是不一
做了点甲基化研究，从头下来，也有一点点体会。也看了院子里不少牛人的新的体会。本人将每一个步骤的具体操作、每个操作的具体注意事项和心得进行初步总结，慢慢叙来，抛砖引玉，欢迎拍砖。 做到现在，有成功的喜悦，也有失败痛苦，且行且歌，总得来说，BSP/MSP，想说爱你不容易。 如有时间，想谈谈：BSP/MSP引物设计；基因组海量甲基化数据分析；MSP设计及操作；当前MSP的研究进展，等等吧…… 1. 确定目的基因后，登陆一下网址：http://genome.ucsc.edu
大家都知道,做MSP亚硫酸盐处理后,需进行纯化,我用的PROMEGE的DNA cleanup试剂盒,按它推荐的方法,每1ugDNA需纯化树脂1ml,而经过我查的文献和反复实验发现,1-2ugDNA用100ul树脂就够了,当然不再是按它的步骤,现将我的步骤公布如下,希望对大家有所帮助: 1. Take 1 -2 ug of DNA and add double-distilled water to 50 mL in a 1.5-mL tube. 2. Add 3.5 uL of 3 M
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