北京哺乳动物蛋白抽提试剂盒厂家

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京哺乳动物蛋白抽提试剂盒厂家，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京哺乳动物蛋白抽提试剂盒厂家
英文名：Mammalian Protein Extraction Kit
规格：25次|100次
编号：WE0262
  本试剂盒能够快速，温和，高效的裂解哺乳动物细胞，有效提取细胞浆和细胞核蛋白。该试剂使用温和配方保证所提取蛋白保持生物学活性并可应用于多种蛋白分析试验，如：报告基因和酶活性测定，免疫检测，蛋白纯化等。提取后蛋白可采用BCA法进行蛋白定量分析。哺乳动物蛋白抽提试剂盒中带有蛋白酶抑制剂混合物，可有效避免蛋白提取过程中蛋白的降解。

试剂盒组成：

 

组份	25次	100次
Mammalian Protein Extraction Reagent	25ml	100ml
Protease Inhibitor Cocktail	250μl	1ml

保存条件：Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它组分：室温

注意事项：
1、本产品可有效裂解细胞培养板培养的贴壁细胞(无需刮取)以及离心收集的悬浮细胞，较反复冻融或超声法具有更高提取效率。但对于组织蛋白的抽提，建议使用组织蛋白抽提试剂盒(WE0260)。
2、表1中所列的是贴壁细胞蛋白提取的最佳使用量，先收集细胞可以减少试剂用量从而获得更高的蛋白浓度。
3、也可以根据细胞数量估计抽提试剂的使用量。如2×106个Hela细胞约重20 mg，需要加入200μl抽提试剂。
4、通过本产品提取的蛋白，可通过BCA法进行蛋白定量分析。

使用方法：

贴壁细胞蛋白抽提
1、请在蛋白抽提前取出实验所需Mammalian Protein Extraction Reagent进行预冷。
2、小心倾去贴壁细胞的培养液，使用PBS漂洗细胞。
3、加入适量Mammalian Protein Extraction Reagent(抽提蛋白前2-3分钟按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail)，在冰上用枪头吹打贴壁细胞，将裂解液转移至离心管中，冰上孵育20分钟，让细胞充分裂解(试剂使用量请参考附表1，冰上放置时间应根据细胞类型不同进行调整)。
4、14000×g离心5-10分钟。
5、转移上清液至新管中，用于进一步分析。

悬浮细胞蛋白提取
1、请在蛋白抽提前取出实验所需Mammalian Protein Extraction Reagent进行预冷。
2、将悬浮细胞2,500×g，离心10分钟，弃去上清。使用PBS漂洗细胞。2,500×g，离心10分钟，弃去上清。
3、加入适量Mammalian Protein Extraction Reagent，抽提蛋白前2-3分钟按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail，即1×工作液。
4、每100 mg细胞加入至少1ml 1×工作液。如提取的样本量较大，可首先使用少量1×工作液重悬细胞，然后加入剩余工作液。
5、吹打均匀后，冰上放置20分钟，让细胞充分裂解(冰上放置时间应根据细胞类型不同进行调整)。
6、14000×g离心15分钟。
7、转移上清至新管中，进行下一步分析。

附表1. 抽提试剂使用量推荐表

细胞培养板类型或平皿类型	抽提试剂使用量
100mm	500-1000μl
60mm	250-500μl
6孔培养板	200-400μl/孔
24孔培养板	100-200μl/孔
96孔培养板	50-100μl/孔

附表2. 常见问题及解决办法

问题	可能原因	解决方法
低提取率	低蛋白表达量	优化转染系统
	试剂使用量不够	增加抽提试剂使用量
	试剂无法溶解细胞膜	增加裂解时间或者加大晃动幅度
无法获得膜蛋白	更适合提取核浆蛋白	使用真核细胞膜蛋白抽提试剂盒

储存条件：-20℃

关于北京哺乳动物蛋白抽提试剂盒厂家的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·植物基因组DNA提取试剂盒
编号：WE0173
英文名称：Plant Genomic DNA Extraction Kit
规格：50次|200次
  本试剂盒适用于从植物组织和植物干粉中提取总DNA，包括基因组DNA，线粒体DNA以及叶绿体DNA。本品可以处理多至100 mg的样本，可纯化获得最大为50 kb的DNA，多数片段在20-30 kb之间。本试剂盒采用先进的硅胶膜技术和简单的离心程序，无需乙醇沉淀，简单快速地分离得到高纯度的DNA，有效去除PCR和其他酶促反应的抑制剂。本品可以在1小时内完成总DNA的提取， 纯化得到的DNA可以直接用于酶切、 PCR、 Real-Time PCR、 文库构建、 Southern Blot、分子标记等下游实验。

试剂盒组成：

组份	50次	200次
Buffer GP1	40ml	160ml
Buffer GP2	40ml	160ml
Buffer GW1(浓缩液)	13ml	52ml
Buffer GW2(浓缩液)	15ml	50ml
Buffer GE	15ml	60ml
吸附柱DM及收集管	50套	200套

自备试剂：β-巯基乙醇、*仿、无水乙醇。

注意事项：
1、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
2、Buffer GP1在使用前请加入β-巯基乙醇，1ml Buffer GP1加1μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer GP1室温可保存1个月。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
4、使用前请检查Buffer GP1和Buffer GP2是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GP1和Buffer GP2于65℃水浴重新溶解。
5、如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer GP1孵育后，加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)，RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0225S。

操作步骤：
1、取植物新鲜组织约100 mg或干重组织约20 mg，加入液氮充分研磨。
2、将研磨后的粉末收集到离心管(自备)中，加入700μl 65℃预热的Buffer GP1(使用前在预热的Buffer GP1中加入β-巯基乙醇，使其终浓度为0.1%)，迅速颠倒混匀后，将离心管置于65℃水浴20分钟，水浴过程中颠倒离心管混匀样品数次。
注意：如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置5-10分钟。
3、加入700μl *仿，充分混匀，12000rpm(～～13400×g)离心5分钟。
4、小心将上层水相转入一新的离心管(自备)中，加入700μl Buffer GP2，充分混匀。
5、将步骤4中所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中。若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤7.
8、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
9、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-100μlBuffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-100μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤9所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤9；若洗脱体积小于100μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。


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·Annexin V-PE/7-AAD凋亡流式检测试剂盒
编号：WE0328
英文名称：Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit
规格：50次
  本试剂盒是一种采用Annexin-PE与7-AAD双染法进行细胞早期凋亡分析的检测试剂盒。
  细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝*酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。Annexin V具有易于结合到磷脂类如PS的特性，对PS有高度的亲和性。因此，该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。PS转移到细胞膜外不是凋亡所独特的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就被破坏。7-AAD是一种核酸染料，可进入死细胞内与DNA结合，能够对坏死和凋亡晚期的细胞进行染色。7-ADD与PI有着相似的荧光特性，但其发射波谱较PI窄，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI的最佳替代品，因此通常将Annexin V-PE与ADD配合染色，以区别凋亡早期细胞与坏死细胞和凋亡的晚期细胞。

试剂盒组成：

组份	50次
4×Binding Buffer	10ml
7-AAD Viability Staining Solution	500μl
Annexin V-PE	250μl

注意事项：
1、消化细胞时不能用含EDTA的胰酶。
2、本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。
3、需自备PBS和去离子水。
4、荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
5、请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤：

1、细胞样品的准备：
a．对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。再次加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。
b．对于悬浮细胞：1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μl左右的PBS，以避免吸走细胞。再次加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。

2、用去离子水按1:3稀释Binding Buffer(4ml Binding Buffer+12ml去离子水)。
3、用250μl Binding Buffer重新悬浮细胞，调节其浓度为1×106/ml。
4、取 100μl 的细胞悬液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V-PE 和 10μl 7-AAD 溶液。
5、混匀后于室温避光孵育 15 分钟。
6、在反应管中加400μl PBS，流式细胞仪(FACS)分析。

实验图例：

Jurkat细胞用顺铂诱导凋亡后用Annexin V-PE/7AAD双染流式分析图谱

储存条件：2～8℃，避光保存


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DL-4-羟基-3-甲氧基扁桃酸  L-Aspartic acid sodiu*(代"m") salt 55-10-7
磷霉素* dATP,2Na 26016-99-9
BL0277 琼脂糖凝胶FF DEAE Sepharose Fast Flow
E0608 抗凝裂解小牛血(无菌)
3767-28-0 PNPG 对硝基*(代"*")基-α-D-吡喃半乳糖苷
SJ0662 质粒小提试剂盒
ARB13479 鸡肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA代测服务 Chicken tumor necrosis factor α,tnf-α ELISA KIT
ARB10417 人丙二醛(MDA)含量测试 Human malondialchehyche,mda ELISA KIT
ARB12759 小鼠E选择素(E-SelectIn/CD62E)尿液中含量检测 Mouse e-selectin ELISA KIT
PY01-177  碱性品红  BS  25克  
ARB12982 小鼠抑制素B(INH-B)Elisa定量检测 Mouse inhibin b,inh-b ELISA KIT
L-丙*酸甲酯盐*(代"酸")盐 Cytochrome C 2491-20-5
BTN120414 DNA拓扑异构酶I DNA Topoisomerase I
ARB11775 人解整合素样金属蛋白酶33(ADAM33)免费代测 
F030704 BIOTIN标记小鼠抗HIS抗体 Monoclonal Mouse Anti-His*BIOTIN
PY02-232  *化*血琼脂基础  250克  
120-23-0 β- Naphthoxyacetic acid (BNOA) β-*氧乙酸
ARB12352 大鼠迟现抗原(VLA)Elisa方法检测 Rat very late appearing antigen,vla ELISA KIT
F030811 BIOTIN标记山羊抗小鼠IgA抗体 Goat Anti-Mouse IgA*BIOTIN
BTN70803 免质粒提取筛选试剂盒 Single Colony Screening Kit
2,3,5-三碘*甲*(代"酸") RTCA 88-82-4

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