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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 免疫原:
重组β-Actin
- 亚型:
IgG2b
- 形态:
液体
- 保存条件:
-20℃冻存,避光
- 克隆性:
多克隆
- 保质期:
二年
- 目录编号:
WE0354
- 级别:
单克隆
- 库存:
538
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 宿主:
小鼠
- 应用范围:
WB,ELISA
- 浓度:
1mg/ml
- 靶点:
β-Actin
- 抗体英文名:
Anti β-Actin Mouse Monoclonal Antibody
- 抗体名:
抗β-Actin单克隆单克隆抗体
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
抗β-Actin单克隆抗体 是高品质的一抗产品,由北京百奥莱博供应,用于生化科学研究,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多抗β-Actin单克隆抗体等一抗产品请联系我司咨询订购。
名称:抗β-Actin单克隆抗体 一抗
规格:100μl
编号:WE0354
英文名:Anti β-Actin Mouse Monoclonal Antibody
品牌:百奥莱博
β-Actin是是横纹肌肌纤维中的一种主要蛋白质成分,也是肌肉细丝及细胞骨架微丝的主要成分。具有收缩功能,分布广泛,分子量为43 kDa,具有高度保守性,在细胞中的表达相对稳定,因此它常被用于校正系统的内参。
抗体类型:鼠单克隆抗体IgG2b
免疫原:β-Actin N末端多肽
应用范围:WB(1:500-5000)
应用种属:人,大鼠,小鼠,兔,猪,鸡,绵羊
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抗β-Actin单克隆抗体 一抗关键词:重组β-Actin抗体,小鼠抗重组β-Actin,WE0354,抗β-Actin单克隆抗体
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抗β-Actin单克隆抗体 一抗关键词:重组β-Actin抗体,小鼠抗重组β-Actin,WE0354,抗β-Actin单克隆抗体
·一步法快速WB试剂盒(兔源一抗)
编号:WE0298
英文名称:One Step Western Kit HRP(Rabbit)
规格:50次
本试剂盒是百奥莱博最新研发的Western Blot检测试剂盒,能够在1小时左右得到高质量的Western Blot结果,且操作简便、检测灵敏度高、背景低、不需再加入二抗、系统稳定性强。常规的Western Blot间接法检测过程(封闭、一抗结合和二抗结合)需要较长的时间,实验流程复杂且需要多步条件优化。胶上的蛋白转移到载体膜上后,使用试剂盒中的封闭液孵育5 min,再用抗体反应液处理后的一抗孵育载体膜,经洗涤三次(每次5 min)后,即可进行发光或显色检测。本试剂盒针对目的蛋白一抗为兔来源的实验系统使用。
| 组份 | 50次 |
| Blocking Buffer |
500ml |
| Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit) | 5×1ml |
| Dilution Buffer | 500ml |
| Wash Buffer(10×) | 500ml |
注意事项:
1、客户需自己准备兔来源的一抗。
2、使用Blocking Buffer封闭液、Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)抗体反应液(兔)、Wash Buffer(10×)漂洗液之前请充分混匀。
3、漂洗液如在2~8℃保存时出现沉淀,请恢复到室温,把沉淀溶解后正常使用,1×漂洗液可在室温保存一个月。
4、建议转膜完成后用丽春红等试剂染色,并把膜上多余部分剪去以增加试剂的使用效率。
5、一抗和抗体反应液HRP(兔)需要通过预实验来确定最佳的稀释用量。
6、抗体反应液HRP(兔)、抗体稀释液和抗体用量可根据膜的大小按比例放大或减少。
7、加入一抗的抗体稀释液可以回收重复使用一次。特异性及亲和力低的抗体不建议重复使用。回收后抗体如在1-2天内使用放置在2~8℃,长期保存请在-20℃冻存,避免多次反复冻融。
8、如果存在较高背景的情况,请调整抗体的用量,并增加洗膜次数。
9、试剂盒内所有试剂请于2~8℃保存,避免冻融。
操作步骤:
本产品适用于转膜完成后的封闭及抗体孵育步骤,以5cm×8cm 膜为例:
1、漂洗液准备:取10ml Wash Buffer(10×)用蒸馏水稀释至100ml,即为1×Wash Buffer,待用。每次洗膜用8-10ml。
2、封闭:转膜完成后,将膜浸没到10ml Blocking Buffer中,室温封闭5分钟。
3、漂洗:倒掉封闭液,加入8-10ml 1×Wash Buffer,于摇床上用较大速度漂洗1分钟。
4、洗膜的同时可准备抗体孵育液:取Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)100μl到离心管中,加入兔源一抗3-10μg,枪头吸打至充分混匀,室温孵育5分钟。加入至10ml Dilution Buffer中,充分混匀。
注意:
1)一抗的用量也可根据抗体的稀释度来进行调整。以抗体的最终稀释度1:1000为例,取100μl抗体反应液HRP(兔)到EP管中,加入10μl一抗,加入到10ml 抗体稀释液中,充分混匀,室温孵育5分钟。
2)如果膜面积较小,可按比例减少抗体、反应液及稀释液的用量。
5、完成步骤3后,倒掉漂洗液,将一抗、Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)及Dilution Buffer混合而成的抗体孵育液加到膜上(确保孵育液完全浸没膜表面),在摇床上以60 rpm左右的速度室温孵育40分钟。
6、弃去(回收)抗体孵育液,用配制的1×Wash Buffer漂洗3-5次,每次3分钟。
7、进行后续检测。建议采用ECL或者DAB法进行检测。
应用实例:
实例一 抗原为293T细胞全裂解液
A:普通WB对照:beta-actin兔多抗 3.3ug 室温孵育40min,洗膜后二抗羊抗兔-HRP(WE0394)1:10000稀释,室温40min,ECL(WE0308)曝光
实例二 抗原为293T细胞全裂解液
C:普通WB对照:PAK1,Epitomics兔单抗1:1000 室温孵育40min,洗膜后二抗羊抗兔-HRP(WE0394)1:10000稀释,室温40min,ECL(WE0308)曝光
D:一步法WB: Epitomics兔单抗1:1000 室温孵育40min,ECL(WE0308)曝光。
常见问题及解决方法:
| 问题 | 可能原因 | 解决方案 |
| 信号太弱或者 看不到条带 |
蛋白上样量太少 | 进行SDS-PAGE电泳时加大上样量。 |
| 蛋白转膜效率太低 | 优化转膜时间或者电流,确保转膜时膜与胶之间没有气泡。 | |
| 一抗亲和力较低 | 增加膜在溶液中的孵育时间或者增加抗 体浓度可以增加信号 |
|
| 一抗亲和力较低 | 对于低亲和力抗体来说,减少洗膜时间可以增加信号。由每次10 分钟,减少到每次5分钟可以增加信号。 | |
| 背景偏高 | 一抗使用过量 | 减少一抗的使用量。 |
| 一抗有非特异性结合或者 与封闭试剂有交叉反应 |
使用和二抗来源一致的血清或者无IgG的BSA。 | |
| 洗膜时间太短 | 增加洗涤的步骤可以进一步的降低背景。 | |
| 曝光显影时间过长 | 减少曝光时间。如果信号和背景都高,可以等待一段时间 ,等背景信号减弱后,再进行曝光。 |
|
| 容器或者试剂被污染 | 每次洗涤的时候使用清洁的容器。带手套,使用清洁的镊子处理膜。 |
储存条件:2~8℃保存,避免冷冻
北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒,更多试剂产品需求,欢迎来电咨询选购抗β-Actin单克隆抗体 一抗。
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文献和实验mnidr 我想做拟南芥基因和烟草基因的NORTHERN,想选择β-actin作为内参,请问,在拟南芥和烟草中β-actin的序列是一样的吗?如果在更远的物种里呢,比如动物???? freecell 脊椎动物中不同物种的β-actin基因氨基酸之间的序列同源性超过98%。其它种属不清楚,你可以在NCBI里面blast一下。 sherwing2009 可以在NCBI中,blast一下,相似
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的话就只能现试试了。 国内好像有公司卖你所需要的抗体,可以检索下查查看! baisuilan 只要不是直接标记一抗,利用二抗带荧光或者酶,那就可以。 免疫荧光和免疫组化差不多,二抗带的标记不一样而已。 本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴 师兄微信号:shixiongcoming
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