北京WE0267型His标签蛋白纯化试剂盒(可溶性蛋白)价格

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北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括北京WE0267型His标签蛋白纯化试剂盒(可溶性蛋白)价格在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：北京WE0267型His标签蛋白纯化试剂盒(可溶性蛋白)价格
品牌：百奥莱博
英文名：His-Tagged Protein Purification Kit(Soluble Protein)
规格：5ml
  本试剂盒包含Ni-Agarose填料、亲和柱空柱以及可溶性His融合蛋白纯化所需的全部试剂(细菌裂解液、蛋白酶抑制剂混合物、结合缓冲液和洗脱缓冲液组分)，使用方便。该镍柱纯化系统对6×His-tag蛋白具有显著特异吸附能力，能够高效一步纯化带有6个组*酸亲和标签的蛋白。该系统具有4个Ni2+螯合位点，较只有3个螯合位点的Ni-IDA结合Ni2+更为牢固，有效防止纯化过程中Ni2+脱落且增强对His标签蛋白的结合能力，提高纯化效率。较高的基团密度，大大提高了蛋白载量。该系统在天然或变性条件下，对来源于各种表达系统(如杆状病毒，哺乳细胞，酵母以及细菌)中的His标签蛋白，均有很好的纯化效果。本产品已螯合镍离子，可直接用可溶性蛋白的纯化，使用方便，快捷。

镍柱参数：
支持物：CL-6B琼脂糖凝胶
载量：20-30 mg His标签蛋白/ml填料
粒径：50-160μM

试剂盒组成：

 

组份	5ml
Ni-Agarose Resin	5ml
Bacterial Protein Extraction Reagent	65ml
1 M Tris-HCl(pH7.9)	15ml
1 M Imidazole	65ml
3 M NaCl	120ml
Protease Inhibitor Cocktail	700μl
吸附柱(12ml)	一套

保存条件：Protease Inhibitor Cocktail，-20℃；Ni-Agarose Resin，2～8℃，避免冷冻；其它组分，2～8℃

注意事项：
1、在纯化之前采用电泳检测蛋白的可溶性，本试剂盒只适合于可溶性蛋白的纯化，如需纯化包涵体蛋白，请选择我公司的包涵体蛋白纯化试剂盒，货号为WE0266。
2、缓冲液中不建议使用 β-巯基乙醇、DTT和EDTA。
3、整个纯化过程中切忌凝胶脱水变干。
4、为提高纯化效率，首先确定Binding Buffer和Elution Buffer中咪唑的最佳使用浓度。必要时可以使用线性或梯度浓度的咪唑浓度，Binding Buffer的范围为0-10 mM，洗脱缓冲液的范围为10-500 mM来进行。并通过SDS-PAGE或Western Blotting来检测目的蛋白的纯度。
5、请使用高纯度的试剂配制缓冲液，并通过0.22μM或者0.45μM过滤器过滤。为避免柱子被堵塞，建议将裂解液进行离心，或者使用0.22μM或者0.45μM过滤器过滤。
6、柱再生时，保证每步洗完后都要用足够的去离子水冲洗至中性。

使用方法：

I 缓冲液的准备
可溶性蛋白纯化缓冲液配方：


 

组份	Tris-HCl(pH7.9)	Imidazole	NaCl
Soluble Binding Buffer	20 mM	10 mM	0.5 M
Soluble Elution Buffer	20 mM	500 mM	0.5 M

II 组装层析柱
1、将Ni-Agarose Resin填料混匀后加入层析柱，室温静置10分钟，待凝胶与溶液分层后，把底部的出液口打开，让乙醇通过重力作用缓慢流出。
注意：
1)填料的上层是乙醇保护层，将填料和乙醇一起混匀，以每ml填料纯化20-30mg His标签蛋白计算，取需要的填料与乙醇的混合液加入层析柱。
2)如果乙醇不流出，可以给柱子一个外力，例如用大拇指对柱口轻轻按压一下，迫使乙醇流出。
3)本实验都是通过重力作用使溶液流出。
2、向装填好的柱中加入5倍柱体积的去离子水将乙醇冲洗干净后，再用10倍柱体积的Binding Buffer平衡柱子，平衡结束后即可上样。
注意：柱体积指的是填料的体积。

III 可溶性蛋白的纯化
1、收集菌体后，每100 mg菌体(湿重)加入1-5ml细菌裂解液(每1ml 细菌抽提试剂中已加入10μl 蛋白酶抑制剂混合物)，超声裂解菌体。
注意：
1)当提取物粘度高或提取蛋白为包涵体时，建议加入DNase I和Lysozyme。每1ml 细菌抽提试剂中加入1μl DNase I(1000U/ml)，2μl Lysozyme(50 mg/ml)，DNase I和Lysozyme可单独从我公司购买，货号：Lysozyme(#WE0214)、 DNase I(#WE0213A)，如使用其它公司产品，请按照相应说明书操作。
2)超声过程中保持菌液处于冰浴中，超声条件依赖于所使用的超声仪功率，探头种类，容器的大小形状，需实验中自己摸索，应避免连续超声导致的大量产热，可分成短时间，多次超声，通过一定的间隔时间避免溶液过热。最终菌液变清即可。
2、10000 rpm,4℃离心3分钟，收集上清中的可溶性蛋白。
3、用Binding Buffer将菌体裂解液等倍稀释后负载上柱，流速为10倍柱体积/小时，收集流穿液。
注意：
1)本试剂盒中附带有一块筛板，使用时先将筛板加至填料的上层，该筛板可用于杂质较多的蛋白的过滤，防止过多的杂蛋白堵塞柱子的作用。再将处理好的样品负载上柱，但是筛板放入柱子后就不易取出。
2)通过控制加入的菌体裂解液的速度来控制流速。
4、使用15倍柱体积的Soluble Binding Buffer冲洗柱子，洗去杂蛋白。
5、使用适量Soluble Elution Buffer洗脱，收集洗脱峰。
注意：洗脱峰可以分管收集，每1ml收集1管，并采用蛋白监测仪监测，收集洗脱峰。
6、洗脱后，依次使用10倍柱体积的去离子水洗涤柱子，再用3倍柱体积的20%乙醇平衡(乙醇要将填料浸没)，封柱后2～8℃保存。
注意：如果是分段梯度洗脱，最大洗脱缓冲液中咪唑浓度未达到500 mM时，则使用浓度为500 mM的咪唑进行洗脱10倍柱体积后，再进行第6步的操作。

Ⅳ 柱再生
当填料使用多次后，结合效率会有所下降(表现为流速变慢或填料失去蓝绿色)，可以用以下方法再生，提高填料的使用寿命和蛋白质的结合效率。
1、使用2倍柱体积的6 M盐*(代"酸")胍冲洗后，使用3倍柱体积的去离子水冲洗。
2、使用1倍柱体积的2% SDS冲洗。
3、依次使用1倍柱体积的25%、50%、75%和5倍柱体积的100%乙醇冲洗，再依次使用1倍柱体积的75%、50%和25%的乙醇冲洗。
4、使用1倍柱体积的去离子水冲洗。
5、使用5倍柱体积含50 mM EDTA缓冲液(PH8.0)冲洗。
6、使用3倍柱体积去离子水，3倍柱体积20%乙醇冲洗。
7、2～8℃保存。
8、再次使用前，需首先使用10倍柱体积去离子水冲洗，然后使用5个柱体积的50 mM NiSO4再生，3个柱体积的Binding Buffer平衡。

储存条件：-20℃

北京WE0267型His标签蛋白纯化试剂盒(可溶性蛋白)价格正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：

·人类基因组DNA
编号：WE0226
英文名称：Human Genomic DNA
规格：20μg
本产品是一类高纯度的基因组DNA提取物，琼脂糖凝胶(0.7%)电泳检测显示该DNA提取物大小在15Kb以上，且基本无降解，可广泛应用于PCR、酶切、杂交、微阵列分析等分子生物学实验。

·生物素标记驴抗小鼠IgG(H+L)
编号：WE0361
英文名称：Donkey Anti-Mouse IgG, Biotin Conjugated
规格：100μl
本产品为生物素标记的经亲和纯化的驴抗体，特异识别小鼠IgG重链和轻链，检测灵敏度高，本底低。生物素与链霉亲和素具有极高的亲和力，反应呈高度专一性。每个链霉亲和素分子具有4个生物素分子结合位点，因此，链霉亲和素可同时以多价形式结合生物素。生物素化的抗体与辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记的链霉亲和素联合使用，将检测信号级联放大，最后通过显色反应或化学发光可检测到微量蛋白。

免疫原：小鼠IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
应用范围：
WB 酶标链霉素检测(1：20000-400000)
ELISA(1：20000-400000)
Enzyme Immunohisto/cytochemistry(1：500-5000)
Flow cytometry(1：200-1000)
Fluorescence Immunohisto/cytochemistry(1：200-1000)

·HRP标记驴抗山羊IgG(H+L)
编号：WE0372
英文名称：Donkey Anti-Goat IgG, Peroxidase Conjugated
规格：100μl
本产品为过氧化物酶标记的经亲和纯化的驴抗体，特异识别山羊IgG，检测灵敏度高，本底低，可用于Western Blot、ELISA 和免疫组化检测。酶标记抗体，是一类广泛用于免疫学、分子生物学及临床医学各个分支学科中的免疫化学制剂，具有特异、敏感和安全的特点。

免疫原：山羊IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：无(叠氮*是HRP抑制剂，抗体稀释液中请避免使用叠氮*作为防腐剂)
应用范围：
WB ECL发光检测(1：10000-200000)
WB 显色检测(1：5000-100000)
ELISA(1：5000-100000)
Immunohisto/Cytochemistry(1：500-5000)


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·抗GFP标签单克隆抗体
编号：WE0346
英文名称：Anti GFP-Tag Mouse Monoclonal Antibody
规格：100μl
GFP或其突变体EGFP与目的蛋白融合表达常用于检测目的蛋白的表达和分布。该抗体特异识别GFP以及EGFP、YFP、EYFP、CFP 等一些突变体。

抗体类型：鼠单克隆抗体IgG1
免疫原：人工合成多肽
应用范围：WB(1：500-2000)、ELISA(1：200-20000)

·细菌蛋白抽提试剂盒
编号：WE0261
英文名称：Bacterial Protein Extraction Kit
规格：100次
  本试剂盒使用温和的非离子型去污剂，适用于大肠杆菌表达的重组蛋白及转染昆虫细胞的蛋白提取。提取过程中不需进行超声破碎，有效避免了外源蛋白的污染。细菌蛋白抽提试剂盒在抽提试剂的基础上添加了溶菌酶、DNase I和蛋白酶抑制剂混合物，可提高蛋白提取效率并减轻因DNA引起的粘稠现象，有效避免蛋白降解。所提取的蛋白保持了生物学活性，可进行IP，Western Blot，蛋白纯化等下游操作。

试剂盒组成：

组份	100次
Bacterial Protein Extraction Reagent	100ml
Protease Inhibitor Cocktail	1ml
Lysozyme(50 mg/ml)	200μl
DNaseⅠ(1000U/ml)	100μl

保存条件：Lysozyme、DNaseⅠ、Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它组分：室温

注意事项：
1、本产品适用于从新鲜或冻存细菌和昆虫细胞中提取蛋白。
2、本品采用Tris缓冲系统，蛋白提取后的纯化操作，请使用相同的缓冲系统。
3、使用本产品获得的蛋白裂解液，可用BCA或Bradford法进行蛋白定量。
4、对于特殊的菌株，如果抽提效果不理想，可在抽提蛋白前冰冻样品。
5、根据具体情况，可在本产品中加入蛋白酶抑制剂、盐、螯合剂、还原剂等。

使用方法：

细菌可溶性蛋白提取
1、5000×g离心10分钟，收集菌体。
2、可选步骤：每1ml Bacterial Protein Extraction Reagent中加入1μl DNase I(1000U/ml)、2μl Lysozyme(50 mg/ml)和10μl Protease Inhibitor Cocktail，涡旋震荡混匀。
3、按照每克菌体沉淀加入20ml Bacterial Protein Extraction Reagent的比例，向菌体沉淀中加入抽提液，充分涡旋或用移液器上下吹打直至菌体完全重悬。
4、重悬后，室温孵育10-15分钟(放置时间应根据细胞类型不同进行调整)。
5、15000×g离心5分钟。
6、转移上清至新的离心管中(上清中即为可溶性蛋白)，进行蛋白定量及下游实验。
注意：如目的蛋白以包涵体形式存在，可使用包涵体蛋白溶解液进行溶解或优化表达条件增加可溶性蛋白的表达。

昆虫细胞蛋白提取
1、低速离心收集细胞。每1ml Bacterial Protein Extraction Reagent中加入10μl Protease Inhibitor Cocktail即为1×工作液。
2、称量细胞湿重，按10ml/g的量加入1×工作液。
3、重悬后，冰上孵育20分钟(冰上放置时间应根据细胞类型不同进行调整)。
4、15000×g离心15分钟，分离可溶性蛋白。

常见问题分析
 

问题	可能原因	解决方法
目的蛋白不溶	目的蛋白表达为包涵体	优化表达条件或使用包涵体蛋白溶解液
		在蛋白抽提试剂中加入Lysozyme 和DNase I
加入Lysozyme 后目的 蛋白仍没有提取出来	温度过低	将使用试剂恢复至室温
	Lysozyme 活性降低或失活	加入更多的Lysozyme 或更换新的酶
提取物粘度高	DNase I 活性降低或失活	加入更多的DNase I 或更换新的DNase I
		将*离子的终浓度增加至2 mM
蛋白抽提后仍有大 部分蛋白存在于沉淀中	蛋白量过大	加入Lysozyme及DNase I
蛋白抽提试剂有沉底析出	温度过低	将蛋白抽提试剂恢复至室温

储存条件：-20℃


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