北京现货细胞膜/细胞浆蛋白抽提试剂盒优惠价

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北京现货细胞膜/细胞浆蛋白抽提试剂盒优惠价是高品质的蛋白质研究产品，由北京百奥莱博供应，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多细胞膜/细胞浆蛋白抽提试剂盒等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。

名称：北京现货细胞膜/细胞浆蛋白抽提试剂盒优惠价
英文名：Membrane and Cytosol Protein Extraction Kit
规格：50T
品牌：百奥莱博
细胞膜/细胞浆蛋白抽提试剂盒用于快速便捷分离细胞/组织细胞膜和细胞浆蛋白，抽提的膜蛋白不仅包括质膜上的蛋白，也包括线粒体膜、内质网膜以及高尔基体膜等上的膜蛋白。主要工作原理：通过匀浆适度破碎细胞，经低速离心去除细胞核和少数未破碎的细胞产生的沉淀，随后取上清高速离心获得细胞膜沉淀和含有细胞浆蛋白的上清，然后通过优化的膜蛋白抽提试剂从沉淀中抽提获取膜蛋白。整个过程仅需约90min即可完成，抽提得到的蛋白可以用于SDS-PAGE，Western、酶活性测定等后续实验。

膜蛋白抽提试剂中含有蛋白酶抑制剂、磷酸酯酶抑制剂和EDTA等，后续不适合用于蛋白酶、磷酸酯酶等受这些抑制剂影响的酶的活性测定，但抽提获得的膜蛋白或细胞浆蛋白适合用于检测蛋白的磷酸化水平。

按照说明书步骤的用量（细胞2-5×107个；组织约100mg），SY0327可分别进行50个样品的抽提，具体用量可根据不同的样品体积进行调整。

试剂盒组份：
试剂A：50ml
试剂B：15ml

储存条件：-20℃，有效期一年。

注意事项
1）客户需自备PMSF，PMSF需现配现用，建议在抽提试剂加入到样品前2-3min加入，以防失效。
2）利用本试剂盒抽提到的细胞膜/细胞浆蛋白可直接用BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)（Yeasen Cat#20201）测定其浓度，但不适合用Bradford法测定。
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法
室温融解并混匀试剂A和B，融解后立即置于冰上。取适量的试剂A和B备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使其最终浓度为1mM。

1 样品准备
1）细胞样品
① 细胞收集
贴壁细胞：培养细胞约2-5×107个，PBS清洗一遍，用细胞刮子刮下细胞或用含有EDTA但不含胰酶的细胞消化液处理细胞，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。
【注】：尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的膜蛋白。
悬浮细胞：培养细胞约2-5×107个，离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。
② 细胞清洗
用适量冰浴预冷的PBS轻轻重悬细胞沉淀，取少量细胞用于计数，剩余细胞4℃，600g离心5min沉淀细胞。弃上清，随后4℃，600g离心1min，以沉淀离心管管壁上的残留液体并进一步沉淀细胞，尽最大努力吸尽残留液体。
③ 细胞预处理：把1ml试剂A(含PMSF)加入至上述细胞中，轻轻并充分悬浮细胞，冰浴放置10-15min。
2）组织样品
取约100mg组织，用剪刀尽量小心剪切成细小的组织碎片。加入1ml试剂A(含PMSF)，轻轻悬浮组织碎片，冰浴放置10-15min。【注】：如果组织样品比较少，也可以使用更少的组织量，例如30-50mg，后续试剂的用量及操作步骤不变；组织用量较少时，最后获得的膜蛋白也较少。

2 样品的破碎及破碎效果的鉴定
① 样品匀浆：把细胞悬液或组织样品转移到一适当大小的冰浴预冷玻璃匀浆器中，匀浆约30-50下。【匀浆效果与细胞类型和组织类型相关，不同细胞或组织所需的匀浆次数有所不同，需自行优化。】
② 通常在匀浆30次后取约2-3µl匀浆液滴在盖玻片上并在显微镜下观察，如见细胞核周晕环(A shiny ring around the nuclei)或完整的细胞形态，说明细胞仍完整。如果有70-80%的细胞均无核周晕环和完整细胞形态，说明细胞已经充分破碎，则进行下一步实验。否则，重新匀浆10-30次直到细胞至少70%已经破碎。同时记录对于该细胞的匀浆次数，通常在后续实验时不必再摸索匀浆次数。另外需注意特定的匀浆次数和匀浆器也有关，需同时注意记录使用的是哪一个匀浆器。
【注】：如果没有适当的玻璃匀浆器，对于培养的细胞也可以采用反复冻融法来破碎细胞。把样品在液氮和室温依次反复冻融两次，然后取少量样品在显微镜下检测细胞破碎的程度。如果细胞破碎的程度不足70%，可增加冻融次数，直到细胞破碎的程度大于70%。

3 去除细胞核和未破碎的细胞
在4℃，700g离心10min，小心收集上清液至一新的离心管中。【注】：吸取上清时切勿接触沉淀！可以有约30-50µl上清液残留不予吸取，以保证吸取的上清液有较高的纯度。

4 沉淀细胞膜碎片
在4℃，14000g离心30min，以沉淀细胞膜碎片。

5 收集细胞浆蛋白
吸取上清至1新的离心管中，即为细胞浆蛋白，可-70℃保存备用。吸取上清时可以有30-50µl上清残留，以避免接触沉淀导致上清样品被污染。

6 抽提膜蛋白

4℃，14000g离心10sec，尽最大努力吸尽上清。可以轻轻触碰到沉淀，甚至吸走很少量的沉淀。加入试剂B 200µl(如有必要，也可加大到300µl)，最高速剧烈Vortex 5sec重悬沉淀，冰浴5-10min。重复前述步骤的vortex和冰浴孵育1-2次，以充分抽提膜蛋白。随后，4℃，14000g离心5min，收集上清即为细胞膜蛋白溶液。可-70℃保存备用。对于一些有特殊用途的膜蛋白，可自行配制适当的膜蛋白抽提试剂进行膜蛋白抽提。

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·Alexa Fluor 488标记驴抗兔IgG(H+L)
编号：SY0726
英文名称：Alexa Fluor 488 AffiniPure Donkey anti-Rabbit IgG (H+L)
规格：100μl
本品是由Alexa Fluor 488标记的驴抗兔IgG（H+L），使用抗原偶联的琼脂糖微珠从驴抗血清内亲和色谱纯化所得。免疫电泳和/或ELISA法检测显示本品特异性结合完整的兔IgG分子，也会与其他兔免疫球蛋白的轻链结合。本品预先与相近物种包括牛、鸡、山羊、豚鼠、叙利亚仓鼠、马、人、小鼠、大鼠和绵羊血清蛋白经过亲和吸附处理，ELISA和/或固相免疫吸附检测证实本品与以上物种几乎无交叉反应，但可能会与其他物种免疫球蛋白发生交叉反应。本品不会识别非免疫球蛋白类的血清蛋白。

Alexa Fluor 488的光谱性质同FITC，Amax（最大激发波长）为493nm，Emax（最大发射波长）为519nm。本品适合做多标实验，广泛应用于多种免疫学实验如免疫细胞化学（ICC），流式细胞术（FC）以及免疫组化（IHC）等。

浓度：0.75 mg/ml
缓冲液：0.005M 磷酸*，0.125M *化*， pH 7.6
稳定剂：7.5mg/ml BSA（无IgG，蛋白酶），50% 甘油
防腐剂：0.025% 叠氮化*
推荐稀释比例：1:50～400（适合多数实验）
储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期一年。


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·PPARγ-Luc报告基因慢病毒颗粒
编号：SY0147
英文名称：Lentivirus PPARγ Luciferase Reporter
规格：50μl×4管；2×10e7TU/ml
PPARγ-Luc报告基因慢病毒是用于检测PPARγ转录活性水平为目的的报告基因慢病毒颗粒。PPAR(peroxisome proliferator-activated receptor)是调节靶基因表达的核内受体转录因子超家族成员，可分为α、β和γ三种类型。其中PPARγ主要表达于脂肪组织及免疫系统，与脂肪细胞分化、机体免疫及胰岛系统抵抗关系密切。

PPARγ-Luc报告基因慢病毒主要用于监控细胞内的PPARγ转录活性、肿瘤治疗药物的研发以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMLV-PPARγ-Lu是在pGMLV-Lu慢病毒载体的多克隆位点插入了多个PPARγ结合位点，可以高灵敏度地检测PPARγ的激活水平。采用慢病毒作为报告基因的优点在于它能够感染多种难感染的细胞，比如原代细胞、干细胞、神经元细胞等。而且慢病毒能够将外源基因插入细胞基因组内，实现稳定转染。

质粒图谱



使用说明
PPARγ报告基因慢病毒颗粒采用慢病毒转染方法转染哺乳动物细胞，用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。

注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）病毒操作时请穿实验服，带口罩和乳胶手套，最好使用生物安全柜，如使用普通超净工作台操作病毒，请不要打开风机。
3）操作病毒时必须特别小心，不要产生气雾或飞溅。如操作时超净台有病毒污染，立即用10%次*酸*溶液搽拭干净。接触过病毒的枪头、离心管和培养板等需用10%次*酸*溶液浸泡1h以上后弃去。
4）用显微镜观察细胞感染情况时应遵从以下步骤：拧紧培养瓶或盖紧培养板。用70%乙醇清理培养瓶外壁后到显微镜出观察拍照。离开显微镜试验台前，用70%乙醇清理实验台。
5）病毒操作完成后，用肥皂清洗双手。

储存条件：-80℃。


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2-噻*(代"吩")甲酰三*丙*(代"酮") DL-Theronine 326-91-0
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53-84-9 NAD 氧化型辅酶Ⅰ
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PY08-011  M-H平板 9CM  10皿/盒，用于抗生素敏感试验
9005-64-5 Tween-20  吐温-20
56-84-8 Guanosine鸟苷
E0201 抗凝山羊血(无菌 pet瓶装) 100ml/200ml/500ml
2-*基-2-甲基-1,3-丙二醇 5"-ATP,Na2 115-69-5
BL0958 胶体金标记兔抗豚鼠Ig抗体
7647-17-8 *化铯 Cesium choride(CsCl)
CBZ-L-*丙*酸 5"-ATP,Na2 1161-13-3
酸性偶氮红 EDAC?HC1 3734-67-6
N-三(羟甲基)甲*酸-2-羟基丙磺酸*盐 3,5-Diiodo-L-tyrosine dihydrate 105140-25-8
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