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- 2025年07月14日
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1ml/株
种属来源: 人
组织来源: 肺
疾病特征: 肺癌
细胞形态: 上皮细胞样
生长特性: 贴壁生长
培养基: DMEM培养基，90%；FBS，10%。
生长条件: 气相：空气，95%；二氧化碳，5%; 温度：37 ℃,
传代方法: 1：2至1：6，每周2次。
冻存条件: 90% 完全培养基+10% DMSO，液氮储存
支原体检测: 阴性
人乳腺癌细胞(耐阿霉素),MCF-7/ADR细胞复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
人乳腺癌细胞(耐阿霉素),MCF-7/ADR细胞贴壁细胞: 对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基，吸的越干净越好，以免中和后加入的消化液，使强度减弱（或PBS洗1－3次）。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml，按此比例进行消化，(根据经验)，晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入2-3ml完全培养基后，轻轻吹打，使细胞基本成单个悬浮，然后分置其它无菌培养瓶内，加入完全培养基后继续培养或实验。
人乳腺癌细胞(耐阿霉素),MCF-7/ADR细胞培悬浮细胞: 一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，加入完全培养基继续培养，如要高浓度可先离心1000rpm，5min后加入完全培养基，轻轻吹匀后，分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养。需要指出的是，在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群除非细胞经过了遗传改造。
人乳腺癌细胞(耐阿霉素),MCF-7/ADR细胞培养基的配制
| 培养基 | 品牌 | 货号 | |
| D-MEM/F-12 | GIBCO | 12400024 | |
| Dulbecco's Modified Eagle Medium (D-MEM), powder (high glucose) | GIBCO | 12800017 | |
| F-12 Nutrient Mixture (Ham) powder | GIBCO | 21700075 | |
| Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM) powder | GIBCO | 12200036 | |
| Leibovitz's L-15 Medium powder | GIBCO | 41300039 | |
| McCOY's 5A |
|
M4892 | |
| Minimum Essential Medium (MEM) Alpha Medium powder (MEMα) with ribonucleosides and deoxyribonucleosides |
GIBCO | 11900024 | |
| Minimum Essential Medium (MEM) Alpha Medium powder (MEMα) without ribonucleosides and deoxyribonucleosides |
GIBCO | 12000022 | |
| Minimum Essential Medium (MEM) powder | GIBCO | 41500034 | |
| NUTRIENT MIXTURE F12 HAM KAIGHN'S MODIFICATION (F12K) |
SIGMA | N3520 | |
| RPMI Medium 1640 | GIBCO | 31800022 | |
| EGF | SIGMA | E9644 | |
| Sodium pyruvate | SIGMA | P2256-25G | |
| MEDIUM 199, WITH EARLE'S SALTS AND L-GLUTAMINE, WITHOUT SODIUM BICARBONATE. CELL CULTURE TESTED | SIGMA | M5017 |
3、 调pH至7.2左右。
4、 加水至最终体积。
5、 在超净台中对溶液进行滤过除菌，分装入250 mL或500 mL玻璃瓶中，用翻帽塞塞紧瓶口。
6、 瓶口封好，4℃冰箱贮存。
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文献和实验Nature 深度剖析：管坤良与 Alj 组研究成果为何截然相反，Hippo 通路调控乳腺癌的两面性
活性或 YAP/TAZ 蛋白。 基于此，作者进一步发现，敲降 LATS1/2 增加了 MCF-7 等腔面型乳腺癌细胞中 ERα 的稳定性，使癌细胞耐受内分泌治疗药物氟维司群（Fulvestrant, 可诱导 ERα 降解），但不影响 ERα 拮抗剂他莫昔芬（Tamoxifen）的疗效。 但出乎预料的是，2021 年 3 月 3 日，Hippo 领域大牛，来自美国加州大学圣地亚哥分校的管坤良课题组于 Nature 以 Matters arising 的形式发表题为 Hippo signalling
HepG-2 人肝癌细胞 QGY-7701 人肝癌细胞 Bel-7402 人肝癌细胞 SMMC-7721 人肝癌细胞 BGC-803 人胃癌细胞 BGC-823 人低分化前胃癌细胞 SGC-7901 人胃癌细胞 LOVO 人结肠癌细胞 HCT-8 人结肠癌细胞 CaEs-17 人食管癌细胞 MGC-803 人胃癌细胞 妇科肿瘤 MCF-7 人乳腺癌细胞 MCF/Adr 人乳腺癌阿霉素耐药细胞株 ZR75-1 人乳腺癌细胞
孔培养体积缩小为 384 孔和 1536 孔形式的建议体积。由于接种体积和密度可能因细胞类型和下游应用而异，因此建议针对检测方案优化条件。 方法和材料 实验可以是贴壁生长癌细胞系的肿瘤干细胞，亦可是McCoy's 5a 培养基中培养的 T-29 人结肠癌细胞、F-12K (Kaighn's Mod.) 培养基中培养的 A549 人肺癌细胞，MCF7 人乳腺癌细胞。 另外，HTB-22™ 和 DU 145 人前列腺癌细胞均在杜氏改良 Eagle 培养基 (DMEM) 中培养。所有生长培养基均含有
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