常规考马斯亮蓝染色液

完整蛋白质从 SDS-PAGE 胶中的电洗脱及其 MALDI-TOF MS 分析

地降低电洗脱过程中的蛋白质产率（表 27-2 和 图 27-2)。以 BSA 为例，我们发现其产率降低了 30%。固定处理导致的产率损失似乎对大分子质量蛋白质的作用更剧烈。对于磷酸酶 B 来说，当凝胶经过固定后蛋白质回收率下降了 89%。因此，去掉固定凝胶步骤对于从 SDS-PAGE 凝胶中回收的完整蛋白质有益。如果可能，应使用非固定的考马斯亮蓝染色。已有一些市售的基于考马斯亮蓝的胶体染色液，它们具有很好的灵敏度，而且对蛋白质没有或仅有很少的固定作用。这些染色液包括 Qbiogen 公司生产

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）（图）

g ，加1mol/L HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH6.7，定容至100ml， 4℃保存。5. TEMED（四乙基乙二胺）原液6.10%过硫酸铵（用重蒸水新鲜配制）7. pH8.3 Tris-甘氨酸电极缓冲液：称取Tris6.0g，甘氨酸28.8g，加蒸馏水约900ml，调pH8.3后，用蒸馏水定容至1000ml。置4℃保存，临用前稀释10倍。8. 考马斯亮蓝G250染色液：称100mg考马斯亮蓝G250，溶于200ml蒸馏水中，慢慢加入7.5ml 70%的过氯酸，最后补足水

聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定IgG纯度操作方法

，调pH8.3后，用重蒸水定容至1000ml，置试剂瓶中，4℃贮存，临用前稀释10倍。 (3)0.1%溴酚蓝指示剂 (4)染色液 染色液种类较多，染色方法也不完全相同。本实验采用0.05%考马斯亮蓝R250染色液中，含20%磺基水杨酸，其优点是染色、固定同时进行，背景易脱色。0.5%考马斯亮蓝R250的20%磺基水杨酸染色液：考马斯亮蓝0.05g，磺基水杨酸20g，加蒸馏水至100ml，过滤后置试剂瓶内保存。 (5)脱色液 7%乙酸溶液 (6)保存