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文献和实验一. 实验原理SDS-PAGE是对蛋白质进行量化,比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。SDS是一种去垢剂,可与蛋白质的疏水部分相结合,破坏其折叠结构,并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中。SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。在样品介质和凝胶中加入强还原剂和去污剂后,电荷因素可被忽略。蛋白亚基的迁移率取决于亚基分子量。二. 试剂和器材试剂:1. 5x样品缓冲液(10ml):0.6ml 1mol/L的Tris-HCl(pH
相关专题 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)凝胶的制备至关重要,凝胶制备不均,好好的样品就给糟蹋了,以下是SDS-PAGE胶凝胶的制备步骤。 如何配制SDS-Page 胶凝胶的制备过程: 1、 按要求装配好垂直电泳板,两块玻璃板的两侧及底部用1%的琼脂 糖封边,防止封闭不严而使聚丙烯酰胺液漏出。 2、 将装好的玻璃电泳板倾斜成45~60℃角。 3、 按表3配制所需%浓度凝胶
①10×Running Buffer 将144g Glycine、30.2g Tris Base、10g SDS溶解于1L双蒸水中。 使用时稀释10倍 ②1×Transfer Buffer 将3.03g Tris Base、14.4g Glycine溶解于500mL双蒸水中,加入200mL Methanol,用双蒸水定容至1L ③牛奶封闭液 将2.0g牛奶溶解于20mLTBST中(对应于一块膜的量)。 ④TBST NaCl 150mM Tris・










