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100μl(20T)
Annexin V 是一种分子量为 35~36kD 的 Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故 可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此 Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡 的灵敏指标之一。将 Annexin V 进行荧光素(EGFP)标记,以标记了的 Annexin V 作为荧光探针,利用荧 光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。
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文献和实验Buffer 含有 Ca2+,主要是促进Annexin V 与 PS 的结合。不加 Binding Buffer,会导致 Annexin V 的结合能力降低,造成阳性信号大幅下降甚至无阳性信号。 Q:如何设置补偿管? A:实验设计时,考虑到补偿,建议设置全单染管调节补偿,如果样本有明显的自发荧光,且自发荧光对选择的染料有干扰,则必需设置一管只有自发荧光的细胞管(对于表达荧光蛋白的细胞,不加任何试剂的空白对照组作为EGFP的单阳组;对于有荧光的药物,细胞只加药物处理,作为药物的单阳组),用来调节补偿
带EGFP的细胞如何做凋亡?Elabscience Annexin V配色避坑攻略,一文吃透!
在生物研究中,我们有时会遇到对带有荧光的细胞进行凋亡检测的情况,如EGFP。EGFP(增强型绿色荧光蛋白)是最常用的细胞标记蛋白之一,可以在蓝光(488 nm激光)照射下发出绿色荧光。通常以转染的方式将GFP基因融入目标细胞中,以标记特定的细胞类型、观察蛋白的表达情况或基因的表达活性等。 Annexin V是常用的细胞凋亡检测方法之一,通过其在特定环境下与磷脂酰丝氨酸(PS)的结合能力,可对因凋亡而导致PS外翻至细胞膜外表面的细胞进行鉴定;结合核酸染料(如PI)的使用,可进一步分辨凋亡
示例: Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左)或未加药 (右)处理4h,FITC-Annexin V/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后,流式细胞仪荧光检测。 Annexin V-FITC单阳性细胞为早期凋亡细胞,Annexin V-FITC和PI染色双阳性的细胞为坏死细胞或者晚期凋亡。PI单染色阳性位裸核细胞。 实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况,检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。 流式检测细胞凋亡的数据分析方法: 1) 选中所有颗粒,将FSC











