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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
室温
- 保质期:
12个月
- 英文名:
Oil Red O Stain Kit
- 库存:
642
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括北京油红O染色试剂盒现货供应在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:北京油红O染色试剂盒现货供应
品牌:百奥莱博
规格:50ml
编号:SY0586
英文名:Oil Red O Stain Kit
产地:国产|进口
本油红O染色试剂盒,其内的染液安全无毒,对人体无伤害。操作简单,性能稳定,显色清晰,且颜色对比鲜明且染色稳定。染色切片保存时间长且不易褪色。
油性红O(Oil Red O)是一种脂溶性偶氮染料,是很强的脂溶剂和染脂剂,能特异性地使组织和细胞内中性甘油三脂、脂质以及脂蛋白等染色。当组织切片置入染液时,染料则离开染液而溶于组织内的脂质(如脂滴)中,使组织内的脂滴呈红色。用于分析细胞样品中脂质状况。油红O染色法,由于其观察性更好,染色更深,因此,目前已广泛的替代了其他脂质染色法,如苏丹III、 染色法等。
油性红O染色试剂盒,主要用于病理状态下组织脂肪的检测。正常情况下,除脂肪细胞外其他细胞内一般不见或仅见少量脂滴。在病理状态下这些细胞中出现脂滴或脂滴明显增多,特别是在心、肝、肾等实质器官发生脂肪变性时,胞浆内出现大小不一的空泡,这时需用脂肪染色鉴定该空泡是否为脂肪变性;此外,脂肪染色还有其他多种用途:1)在动脉粥样硬化时,用脂肪染色可检测内皮细胞下的脂质沉着;2)显示脂肪栓塞栓子内的脂质,从而确诊脂肪栓塞;3)用于肿瘤组织的鉴别诊断,由脂肪组织所发生的肿瘤在与其他组织来源的肿瘤相区分时,可以借助脂肪染色,脂肪组织所发生的肿瘤,脂肪染色为阳性。
产品组份:
油红O储存液————50ml×1瓶
油红O稀释液————20ml×1瓶
复染液——————50ml×1瓶
水性封固剂————10ml×1瓶
注意事项
1)封片时不可用油溶性封固剂封片,即千万不可用中性树胶封片,只可用本产品所携带的水性封固剂封片,否则会影响脂类染色效果;
2)封片时片子不宜太干,否则易起气泡,封片速度要快,防止凝固,发现有气泡时不宜压盖玻片驱赶,这会使脂滴移位,若气泡多,可用温水浸掉盖玻片后再封片。
3)乙醇、丙*(代"酮")等脂溶剂均会影响对脂质的保存,不宜用作封固剂;
4)水洗时水流不可太大;
5)染色液染色之前,样本片尽量不要湿水;
6)切片时建议使用防脱载玻片,封片时建议使用免洗盖玻片;
7)做油红O染色时,冰冻切片要厚,一般为10-15µm,太薄的话脂肪会流失,可能造成假阴性结果;
8)配好的应用液需用慢速滤纸过滤,防止染色时有杂质;
9)油红O染色时应避免试剂挥发,否则易形成背景沉淀,样本不同具体染色时间会有差异,根据自己的染色结果进行调整;
10)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
储存条件:室温,有效期12个月
想要了解更多关于北京油红O染色试剂盒现货供应的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息,请和我们联系。此外我公司还销*(代"售")下面的产品:
·His标签蛋白纯化预装柱
编号:SY0394
英文名称:Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 5ML
规格:5ml|1ml
Ni-NTA Agarose Resin 6FF以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质,通过化学方法偶联四配位的氮川三乙酸(NTA)为配体,螯合镍离子(Ni2+)后,形成非常稳定的八面体结构,镍离子处于八面体的中心,这样的结构可保护镍离子免受小分子的进攻,更加稳定,可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件。此外,因其基质的耐压性(该基质可以耐受最高0.3 MPa的压力),该产品可以用于工业大规模蛋白的纯化,可在相对较高的流速下,实现对目的蛋白的纯化。
Ni-NTA 6FF Chromatography Column是一种以Ni-NTA Agarose Resin 6FF为填料的中压预装柱,该预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA等,方便客户用于纯化His-tag蛋白。
基质(Matrix):高度交联的6%琼脂糖凝胶
孔径(Bead size):45-165µm
载量(Capacity):>40mg 6×His-tagged protein/ml 基质
耐压(Tolerance Pressuremax):0.3MPa, 3bar
储存缓冲液:含20%乙醇的1×PBS
柱子尺寸(Column Size):0.7×2.5cm(1ml)
储存条件:4℃保存,有效期2年
注意事项
1)建议纯化所用缓冲液和蛋白溶液经0.22µm或0.45µm滤膜过滤后上柱使用。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
(一)纯化流程
1 缓冲液的准备
缓冲液使用原理:低咪唑上样,高咪唑洗脱,或者高pH上样,低pH洗脱。Buffer 在使用前最好用0.22µm或0.45µm滤膜过滤除菌。可溶性组*酸标签蛋白纯化所需配方详见附表1。包涵体组*酸标签蛋白纯化所需缓冲液及配方详见附表2。
2 样品准备
2.1 细菌表达的蛋白(本说明以细菌表达蛋白为例)
1)挑取单菌落到含有适合抗性的LB培养基中,根据载体说明加入相应的诱导剂诱导相应的时间。
2)表达结束后,将培养液转至离心瓶,7000rpm,离心15min,收集菌体,然后加入1/10体积的裂解液(Lysis buffer)和PMSF(PMSF在破碎前加入,其终浓度为1mM),同时也可加入其他蛋白酶抑制剂,但不能影响目的蛋白与树脂的结合。
3)之后加入溶菌酶,使其工作浓度为1mg/ml。【注】:如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE,可以不加入溶菌酶。
4)将菌体沉淀悬浮起来(如果菌液浓度高,可考虑加入10µg/ml RNase A和5µg/ml DNase I),混匀,置于冰上超声破碎细胞,至菌液基本保持澄清。
5)收集上述澄清蛋白液,10000rpm,4℃离心20-30min。取上清,0.22µm/0.45µm滤膜过滤后,置于冰上备用或-20℃保存。
2.2 酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达的可溶性蛋白
将细胞培养液转移至离心瓶,5000rpm离心10min,收集上清。如上清中不含EDTA、组*酸和还原剂等,即可直接上柱纯化;如含有EDTA、组*酸和还原剂等物质,则需用1×PBS 4℃下透析后方可上柱。
【注】:对于大量体积的上清,需加入硫*(代"酸")铵进行沉淀浓缩,之后经1×PBS 4℃下透析后上柱。
2.3 包涵体蛋白纯化(以细菌为例)
1)将培养液转移至离心瓶,7000rpm,离心15min,收集菌体去上清。
2)按照菌体:裂解液=1:10(w/v)的比例将菌体充分悬浮,混匀,冰浴超声破碎。
3)将破碎液转移至离心管,10000rpm,4℃离心20-30min,去上清。可重复步骤2)和3)一次。
4)按照菌体:裂解液(含8M尿素)=1:10(w/v)的比例将包涵体充分悬浮。
5)变性条件下纯化His标签蛋白纯化。
3 样品纯化(以AKTA使用为例)
1)将泵管道注满去离子水。去掉产品上塞,连接至色谱系统中,再折断下口,将预装柱连接到色谱系统中,注意旋紧。
2)3-5倍柱体积去离子水冲洗出存储缓冲液。
3)至少5倍柱体积的Lysis Buffer 平衡色谱柱。推荐流速为5ml/min。
4)利用泵或注射器上样。【注】:若样品粘度增加,即使上样体积很少也会导致层析柱很大的反压;上样量不要超过柱子的结合能力;大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。
5)Wash Buffer 平衡柱子,直到紫外吸收达到一个稳定的基线(一般至少10-15个柱体积)。【注】:在样品和结合缓冲液中加入低浓度咪唑可以提高样品纯度。
6)Elution Buffer一步法或梯度法进行洗脱。一步法洗脱中一般5倍柱体积洗脱液即可。梯度洗脱可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多来分离不同结合强度的蛋白质。
7)建议用更高浓度咪唑(如500mM)彻底清洗纯化柱上结合的杂蛋白。随后依次用3倍柱体积的Lysis Buffer和5倍柱体积的去离子水清洗树脂。5倍柱体积的20%乙醇平衡树脂,最后将树脂保存在20%乙醇的1×PBS中,置于4℃保存。
4 SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。
(二)在位清洗
当填料使用过程中发现反压过高(>0.5Mpa)或者填料上面出现明显的污染时,需对其进行在位清洗(Cleaning-in-Place,CIP)。在位清洗时,先把Ni2+脱掉,清洗结束后,将填料保存在20%乙醇中,后者重新挂Ni后再保存在20%乙醇中。建议按照下面操作去除填料上残留的污染物,如沉淀蛋白、疏水蛋白和脂蛋白等。
1 去除强疏水结合的蛋白,脂蛋白和脂类
使用30%异丙醇清洗5-10个柱体积,接触时间为15-20min可以去除此类污染物。之后再用去离子水清洗10倍柱体积。也可以选择使用含有去污剂的酸性或者碱性溶液清洗填料2倍柱体积。例如含有0.1-0.5%非离子去污剂的0.1M醋酸溶液,接触时间为1-2h。去污剂处理后,需用70%的乙醇清洗5倍柱体积,彻底去除去污剂。最后利用去离子水清洗10倍柱体积。
2 去除离子作用结合的蛋白
使用1.5M NaCl 溶液接触10-15min,之后用去离子水清洗10倍柱体积。
(三)填料再生
当填料使用过程中发现反压过高(>0.5Mpa),填料上面出现明显的污染,或填料载量明显变低时,需要对其进行镍离子剥离及重新挂镍处理,即填料再生。按照下面操作流程进行:
1)使用0.2M 醋酸溶液(含6M GuHCl)清洗2倍柱体积;
2)去离子水清洗5倍柱体积;
3)2%SDS清洗3倍柱体积;
4)去离子水清洗5倍柱体积;
5)乙醇清洗5倍柱体积;
6)去离子水清洗5倍柱体积;
7)100mM EDTA(pH 8.0)清洗5倍柱体积;
8)去离子水清洗5倍柱体积;
9)100mM NiSO4清洗5倍柱体积;
10)去离子水清洗10倍柱体积。
填料再生后,可立即使用,也可保存在20%乙醇中,置于4℃备用。
北京油红O染色试剂盒现货供应关键词:Oil Red O Stain Kit,油红O染色试剂盒,SY0586
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文献和实验案例一:DAB染色后切片着色一片黄/背景深 背景:奥运会期间我们课题组研究生都在实验室做实验,许多从北京购买的试剂买不到,对我们的许多实验产生了很大的影响。 我以前一直用中杉金桥的Sp三步法染色试剂盒,效果不错,在奥运会期间我准备做同批实验分不同批次酶免疫组化实验,第一批组化实验结果很好,抗体浓度感觉比较合适(Santa Cruz公司1:200),等做第二批时发现封闭血清不够了,为了保证实验顺利进行,我又从福州迈新顶了一个SP试剂盒,同时抗体稀释液也不够了,我又重新从博士
背景: 奥运会期间我们课题组研究生都在实验室做实验,许多从北京购买的试剂买不到,对我们的许多实验产生了很大的影响。我以前一直用中杉金桥的SP三步法染色试剂盒,效果不错,在奥运会期间我准备做同批实验分不同批次酶免疫组化实验,第一批组化实验结果很好,抗体浓度感觉比较合适(Santa Cruz公司1:200),等做第二批时发现封闭血清不够了。为了保证实验顺利进行,我又从福州迈新顶了一个SP试剂盒,同时抗体稀释液也不够了,我又重新从博士德公司买了一小瓶10 ml。从第二批实验开始,组化实验
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