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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件:
室温(15~30℃)
- 保质期:
长期
- 英文名:
NewPurify Plant Genomic DNA Extraction Kit
- 库存:
831
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产供应北京新型植物基因组DNA提取试剂盒品牌,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:北京新型植物基因组DNA提取试剂盒品牌
编号:WE0174
英文名:NewPurify Plant Genomic DNA Extraction Kit
规格:50次|200次
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
本试剂盒采用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统,适合从各种不同的植物新鲜或冻存组织中提取基因组DNA,并可最大限度地去除植物组织中的杂质。本试剂盒无需使用酚/*仿抽提,操作安全。提取的基因组DNA片段大、纯度高、质量稳定可靠,适用于PCR、荧光定量PCR、分子标记、文库构建等实验。
试剂盒组成:
| 组份 | 50次 | 200次 |
| Buffer LP1 | 25ml | 100ml |
| Buffer LP2 | 10ml | 40ml |
| Buffer LP3(浓缩液) | 21ml | 84ml |
| Buffer GW2(浓缩液) | 15ml | 75ml |
| Buffer GE | 15ml | 60ml |
| RNase A(10 mg/ml) | 300μl | 1.25ml |
| 吸附柱DM及收集管 | 50套 | 200套 |
自备试剂:无水乙醇
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
2、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer LP3和Buffer GW2中加入无水乙醇。使用前请检查Buffer LP1和Buffer LP2是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将Buffer LP1和Buffer LP2于56℃水浴重新溶解。
操作步骤:
1、取植物新鲜组织100 mg左右或干重组织约20 mg,加入液氮充分研磨。
2、将研磨后的粉末收集到离心管(自备)中,加入400μl Buffer LP1和6μl RNase A(10 mg/ml),涡旋振荡1分钟,室温放置10分钟,使其充分裂解。
注意:
1)使用涡旋振荡或移液器吹打,充分裂解组织,组织裂解不完全会影响最终的DNA得率。
2)请勿在使用前将Buffer LP1与RNase A混合。
3、加入130μl Buffer LP2,混匀,涡旋震荡1分钟。
4、12000rpm(~~13400×g)离心5分钟,将上清移至新的离心管(自备)中。
5、加入1.5倍体积的Buffer LP3(使用前检查是否已加入无水乙醇),充分混匀(如500μl滤液加入750μl Buffer LP3)。
注意:加入Buffer LP3后应立即混匀,可能会产生沉淀但不影响后续实验。
6、将上步所得溶液和沉淀全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
注意:如吸附膜呈现绿色,向吸附柱中加入500μl无水乙醇,12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
8、重复步骤7.
9、12000rpm离心2分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
10、将吸附柱放到一个新离心管(自备)中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-100μl Buffer GE或灭菌水,室温放置2-5分钟,12000rpm离心1分钟,收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
注意:
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)如果要提高DNA的终浓度,可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,重复步骤10;若洗脱体积小于100μl,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少DNA的总产量。如果所得DNA的量小于1μg,推荐用50μl Buffer GE进行洗脱。
4)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
储存条件:室温(15~30℃)。
想要了解更多关于北京新型植物基因组DNA提取试剂盒品牌的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息,请和我们联系。此外我公司还销*(代"售")下面的产品:
·Bradford蛋白定量试剂盒
编号:WE0275
英文名称:Ultra Bradford Protein Assay Kit
规格:800次微孔板(100管次)
Bradford 法是最简单和快速的比色蛋白定量方法。 这一方法基于考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后, 产生蓝色化合物,反应迅速而稳定。反应化合物在465-595 nm处有最大的光吸收值,化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系,因此可通过检测595 nm的光吸收值的大小来计算蛋白的含量。本产品将传统的Bradford方法进行了改良,最大限度的加大蛋白定量的线性范围,变异性小于普通考马斯亮蓝染色法,灵敏度范围为100-1,500μg/ml。使用本产品反应迅速,颜色产物1小时内保持稳定。本试剂盒适用于多种缓冲液系统,不受金属离子、还原剂和螯合剂的干扰。
试剂盒组成:
| 组成 | 规格 |
| Bradford Protein Assay Reagent | 2×100ml |
| BSA Standard Solution(2mg/ml) | 2ml |
注意事项:
1、BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致(可用1×PBS或0.9%生理盐水进行稀释)。
2、本试剂盒不适合含有去污剂的蛋白定量,具体干扰物质(具体见附表1),可采用BCA蛋白定量试剂盒(WE0276)或其他蛋白定量产品。
3、所测蛋白分子量必须大于3 kD。
使用方法:
1、稀释BSA标准品:用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。
| 管号 | 稀释液用量(μl) | BSA标准品用量(μl) | BSA标准品最终浓度(μg/ml) |
| A | 0 | 100 | 2000 |
| B | 50 | 150 | 1500 |
| C | 200 | 200 | 1000 |
| D | 200 | 200(从C管中取) | 500 |
| E | 200 | 200(从D管中取) | 250 |
| F | 200 | 200(从E管中取) | 125 |
| G | 200 | 0 | 0(空白) |
2、试管检测(检测范围:100-1500μg/ml)
1)按上表稀释标准品,将30μl稀释好的BSA标准品分别加到作好标记的试管中。
2)取干净的试管,分别加入30μl待测蛋白样品(原液或稀释液),并作好标记,推荐每个测定做2-3个平行反应。
3)向步骤1)和步骤2)的试管中各加入1.5ml Bradford Protein Assay Reagent,充分混匀,室温放置10分钟。
4)用分光光度计测定595 nm处的吸光值。
5)绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。
注意:数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线,可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。
6)如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内,请重新稀释样品后再次测定。
3、微孔检测(检测范围:100-1500μg/ml)
1)将按表1稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各5μl分别加到作好标记的96孔板微孔中。
2)每孔加入250μl Bradford Protein Assay Reagent,充分混匀,盖上96孔板盖,室温放置10分钟。
3)用酶标仪测定595 nm处的吸光值。
4)绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。
注意:数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线,可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。
5)如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内,请重新稀释样品后再次测定。
附表1. 干扰物质表
| 化合物 | 耐受浓度 |
| 缓冲液 | |
| 乙酸盐 | 0.6M |
| 甘*酸 | 0.1M |
| HEPES | 0.1M |
| MES | 0.7M |
| MOPS | 0.2M |
| Na+-柠檬酸 | 50mM |
| PIPES | 500mM |
| 磷酸*/磷酸* | 1M |
| 乙酸* | 0.6M |
| Tris | 2M |
| 盐类 | |
| 硫*(代"酸")铵 | 1M |
| NaCl | 1M |
| 尿素 | 6M |
| 极性化合物 | |
| 甘油 | 99% |
| 还原剂 | |
| β-巯基乙醇 | 1M |
| DTT | 1M |
| 去垢剂和变性剂 | |
| Brij35 | 干扰 |
| 脱氧胆酸纳 | 0.25% |
| CHAPS | 1% |
| NP-40 | 干扰 |
| 辛葡糖 | 2% |
| SDS | 0.1% |
| Tween-20 | 干扰 |
| Triton X-100 | 0.1% |
| 糖类 | |
| 蔗糖 | 1mM |
| 螯合剂 | |
| EDTA | 100mM |
| EGTA | 50mM |
| 其他 | |
| HCl | 0.1M |
| NaOH | 0.1M |
| NAD | 1mM |
| * | 5% |
储存条件:2~8℃
北京新型植物基因组DNA提取试剂盒品牌关键词:WE0174,NewPurify Plant Genomic DNA Extraction Kit,新型植物基因组DNA提取试剂盒
DL-乳酸 FMOC-OSU 50-21-5
利巴韦林 D-Trytophan 36791-04-5
二硫化钼 Amberlyst AB-8 1317-33-5
ARB11710 人黑色素瘤标记物(MART/MelAn-A)Elisa定量检测 Human melanoma marker a,mart/melan-a ELISA KIT
ARB11959 大鼠Apelin 12(AP12)ELISA检测服务 Rat apelin 12,ap12 ELISA KIT
F030510 FITC标记羊抗乙肝表面抗原抗体 Polyclonal Goat Anti-HBsAg*FITC
H33342荧光染料 CPA-I 23491-52-3
L-*甘*醇 Cibacron Blue F3G-A 20989-17-7
HC0246 Eppendorf单道可调移液器
聚丙*(代"烯")酸树脂Ⅳ D-(?)-Lyxose 24938-16-7
BTN80902 大提柱式血液RNAOUT Maxi Column Blood RNAOUT
F030703 BIOTIN标记小鼠抗乙肝表面抗原抗体 Monoclonal Mouse Anti-HBsAg*BIOTIN
ARB12340 大鼠补体5A(C5A)酶标法分析 Rat complement fragment 5a,c5a ELISA KIT
北京新型植物基因组DNA提取试剂盒品牌关键词:WE0174,NewPurify Plant Genomic DNA Extraction Kit,新型植物基因组DNA提取试剂盒
·Bes Taq DNA Polymerase
编号:WE0103
英文名称:Bes Taq DNA Polymerase
规格:500U|2500U
Bes Taq DNA Polymerase具有5"→3"DNA聚合酶活性和5"→3"外切核酸酶活性。在普通的PCR条件下,与Taq DNA Polymerase相比,具有扩增效率高、错配率低的优良性能,兼具有Taq DNA Polymerase的高扩增效率和Pfu DNA Polymerase的高保真性。使用本品扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基,因此可直接用于T/A克隆。本产品适用于常规的PCR反应和对保真性有要求的基因克隆等反应。
产品组成:
| 组份 | 500 U | 2500U |
| Bes Taq DNA Polymerase, 5 U/μl | 100μl | 5×100μl |
| 10×PCR Buffer | 1.8ml | 5×1.8ml |
活性定义:
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在74℃,30分钟内,将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。
质量控制:
1、经过多次柱纯化,SDS-PAGE检测其纯度大于99%;
2、经检测无外源核酸酶活性;
3、PCR方法检测无宿主残余DNA;
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因;
5、室温存放一个月,无明显活性改变。
使用方法:
以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| 10×PCR Buffer | 5μl | 1× |
| dNTP Mix,10 mM each | 1μl | 200μM each |
| Forward Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
| Reverse Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
| Template DNA | <0.5μg | <0.5μg/50μl |
| Bes Taq DNA Polymerase,5 U/μl | 0.25-0.5μl | 1.25-2.5U/50μl |
| ddH2O | up to 50μl |
注意:引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2、PCR反应条件
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 2min | |
| 变性 | 94℃ | 30s | 25-35个循环 |
| 退火 | 55-65℃ | 30s | |
| 延伸 | 72℃ | 30s | |
| 终延伸 | 72℃ | 2min |
注意:
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定,本产品Bes Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
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