高纯质粒小提试剂盒 DNA纯化

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖高纯质粒小提试剂盒 DNA纯化在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：高纯质粒小提试剂盒 DNA纯化
编号：WE0162
英文名：PlaPure Mini Extraction Kit
规格：50次|200次
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
  本试剂盒提供一种简单、快捷、高效的提取质粒的方法，在碱裂解法裂解细胞的基础上，采用独特的硅基质膜吸附技术和试剂配方，通过离心吸附柱在高盐状态下高效专一的结合溶液中的质粒DNA，经过两步洗涤，一步洗脱，最大限度的去除蛋白质、基因组、RNA和其他杂质。得到的质粒DNA可直接用于细胞转染、PCR、酶切、测序、连接等生物学实验。

试剂盒组成：

 

组份	50次	200次
Buffer P1	15ml	60ml
Buffer P2	15ml	60ml
Buffer N3	20ml	80ml
Buffer PB	10ml	35ml
Buffer PW(浓缩液)	6ml	25ml
Buffer EB	10ml	30ml
RNase A(10mg/ml)	150μl	600μl
吸附柱DM及收集管	50套	200套

自备试剂：无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、所有组分可在干燥、室温(15～30℃)环境稳定保存1年，将吸附柱置于2～8℃可保存更长时间，加入RNase A的Buffer P1 置于2～8℃可稳定保存6个月。
2、第一次使用前，将RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混匀，置于2–8℃保存，使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前若发现Buffer P2、Buffer N3、Buffer PB有沉淀，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清(请勿剧烈晃动Buffer P2)。
5、注意不要直接接触Buffer P2 、Buffer N3和 Buffer PB，使用后应立即盖紧盖子。
6、提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。

操作步骤：
1、取1-5ml过夜培养的菌液加入离心管(自备)中，13000rpm(~～16200×g)离心30秒收集菌体沉淀，尽量吸弃上清。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入250μl Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A)，使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮菌体沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，将会影响裂解效果，导致提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入250μl Buffer P2，温和地上下颠倒混匀4-6次，充分混匀使菌体裂解，此时溶液应变得清亮粘稠。
注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。此步骤所用时间应不超过5分钟，避免质粒受到破坏。
4、向离心管中加入350μl Buffer N3，立即温和地上下颠倒混匀8-10次，充分混匀，此时应出现白色絮状沉淀。13000rpm离心5分钟。
注意：Buffer N3加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。
5、将步骤4中所得的上清液转移到已装入收集管的吸附柱DM中，13000rpm离心30秒钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、向吸附柱中加入150μl Buffer PB，13000rpm离心30秒。
7、向吸附柱中加入400μl Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇)，13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。
8、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附膜的中间部位加入50-100μl Buffer EB，室温放置2分钟，13000rpm离心1分钟，将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
注意：
1)为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2分钟，13000rpm离心1分钟，将质粒溶液收集到离心管中。
2)质粒拷贝数较低或>10 kb时， Buffer EB在65-70℃水浴预热，可以增加提取效率。

储存条件：室温(15～30℃)。


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·细胞核/浆蛋白抽提试剂盒
编号：WE0265
英文名称：Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒能够简单、快速的提取来源于哺乳动物细胞及组织的细胞核和细胞浆蛋白，所提取蛋白保持生物学活性。本试剂盒首先通过细胞浆蛋白抽提试剂裂解细胞膜，释放细胞浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。抽提获得的核蛋白及浆蛋白纯度高，有效避免核/浆蛋白的交叉污染，可以用于Western、Gel Shift、报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer A	50ml
Buffer B	3ml
Buffer C	25ml
Protease Inhibitor Cocktail	750μl

保存条件：Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它组分：2～8℃

注意事项：
1、如需提取磷酸化蛋白请在抽提试剂中加入磷酸酶抑制剂。
2、所有样品操作请置于冰上进行。
3、可根据具体实验情况调整试剂用量，保证各试剂使用比例为Buffer A:Buffer B:Buffer C=100:5.5:50。
4、可以采用更高的速度来离心。

使用方法：

一、细胞中胞浆、胞核蛋白的提取
1、请在蛋白抽提前取出抽提试剂Buffer A和Buffer C进行预冷
2、收集细胞，计数。离心去上清。
3、1×107细胞中加入1ml Buffer A(按照1:99比例在蛋白抽提前2-3分钟内加入Protease Inhibitor Cocktail)，涡旋5秒以充分混匀，冰上孵育20分钟。
注意：各种细胞的特性不同，需要根据不同细胞的特性调整Buffer A的用量，如果蛋白浓度小，按比例减少Buffer A及后续Buffer B、Buffer C的用量。
4、加入55μl Buffer B，涡旋5秒以充分混匀，冰上孵育 1分钟。
5、4℃ 12000rpm(~～13400×g)离心 15分钟，收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中，-20℃保存(此提取液为胞浆蛋白)。
6、向上步所得的沉淀中加入500μl Buffer C(使用前按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail)，涡旋5秒以充分混匀，重悬沉淀，冰上孵育40分钟，每隔10分钟涡旋混匀一次，每次约15-30秒。
7、4℃ 12000rpm离心15分钟，收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中，-20℃保存(此提取液为胞核蛋白)。

二、组织中胞浆、胞核蛋白的提取
1、取材，保存组织。
2、在蛋白抽提前取出抽提试剂Buffer A和Buffer C进行预冷。
3、称组织重量，每100 mg组织中加入1ml Buffer A(按照1:99比例在蛋白抽提前2-3分钟内加入Protease Inhibitor Cocktail)，用匀浆器在冰上充分匀浆，放置在冰上孵育20分钟。
注意：各种组织的特性不同，需要根据不同组织调整Buffer A的用量，如果蛋白浓度小，按比例减少Buffer A及后续Buffer B、Buffer C的用量。
4、加入55μl Buffer B，涡旋5秒以充分混匀，放置在冰上孵育 1分钟。
5、4℃ 12000rpm离心 15分钟，收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中，-20℃保存(此提取液为胞浆蛋白)。
6、向上步所得的沉淀中加入500μl Buffer C(使用前按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail)，涡旋5秒以充分混匀，重悬沉淀，冰上孵育40分钟，每隔10分钟涡旋混匀一次，每次约15-30秒。
7、4℃ 12000rpm离心15分钟，收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中，-20℃保存(此提取液为胞核蛋白)。

储存条件：-20℃


高纯质粒小提试剂盒 DNA纯化关键词：高纯质粒小提试剂盒,WE0162,PlaPure Mini Extraction Kit


·细菌RNA提取试剂盒(含DNase I)
编号：WE0199
英文名称：RNAtiqu Bacteria RNA Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒采用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统，可从细菌或培养的动物细胞中快速提取总RNA。30-40分钟内即可完成反应，提取的总RNA纯度极高，没有蛋白质和其他污染，适用于RT-PCR、Real-Time RT-PCR、芯片分析、体外翻译等实验。

试剂盒组成：

组份	50次
DNase I	1000 U
10×Reaction Buffer	1000μl
Buffer RL	35ml
Buffer RW1	40ml
Buffer RW2(浓缩液)	11ml
RNase-Free Water	10ml
过滤柱FL及收集管	50套
吸附柱RM及收集管	50套
RNase-Free离心管(1.5ml)	100个

保存条件：DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存，其它组分室温(15～30℃)。

自备试剂：Lysozyme(WE0214S)、β-巯基乙醇、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
1)使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2)配制溶液应使用无RNase的水。
3)操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、Buffer RL在使用前请加入β-巯基乙醇至终浓度为1%，如1ml Buffer RL加10μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RL 4℃可保存1个月，如出现沉淀，请加热溶解后使用。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
4、如未特殊说明，所有离心步骤均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

操作步骤：
1、4℃ 12000rpm(~～13400×g)离心2分钟收集菌体(菌体量最大不超过1×109)，小心去除所有上清。
注意：上清如果有残留，会影响后续的消化过程。
2、用含有Lysozyme的100μl TE缓冲液彻底重悬菌体，室温孵育。具体配方和孵育时间如下：

	TE缓冲液中Lysozyme的终浓度	孵育时间
G-细菌	400μg/ml	3-5分钟
G+细菌	3 mg/ml	5-10分钟

3、加入350μl裂解液RL(使用前请检查是否加入β-巯基乙醇)，涡旋震荡混匀(此步骤可能出现不溶性沉淀)，将溶液与沉淀全部加入到已装入收集管的过滤柱中，12000rpm离心2分钟。
4、向上步得到的滤液中加入250μl无水乙醇，混匀(此时可能会出现沉淀)。将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱中，12000rpm离心1分钟，弃掉废液，将吸附柱重新放回收集管中。
5、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、配制DNase I 混合液：取52μl RNase-Free Water，向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl)，混匀， 配制成终体积为80μl的反应液。
7、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液，20-30℃孵育15分钟。
8、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心1分钟,弃废液。
10、重复步骤9。
11、将吸附柱放回收集管中，12000rpm离心2分钟。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱装入新的RNase-Free的收集管中，向吸附膜的中间加入30-50μl RNase-Free Water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
注意：
1)RNase-Free Water体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤12。

储存条件：室温(15～30℃)。


高纯质粒小提试剂盒 DNA纯化关键词：高纯质粒小提试剂盒,WE0162,PlaPure Mini Extraction Kit

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