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Protein A-Agarose
301
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括WE0271型Protein A琼脂糖凝胶优惠在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:WE0271型Protein A琼脂糖凝胶优惠
编号:WE0271
英文名:Protein A-Agarose
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
本产品可从血清,腹水,细胞培养上清和细胞抽提物中分离和纯化多种哺乳动物丌同亚型的抗体或包含抗体 Fc片段的基因工程重组蛋白。具有高IgG结合特异性,高流速,低Protein A-Agarose脱落等特点。
注意事项:
1、凝胶从冷室或冰箱中取出后在室温下缓慢振摇恢复到室温后装柱,避免产生气泡影响柱效。
2、装柱时尽可能维持凝胶长径比为5:3-2:1,长径比过大将导致洗脱峰拖尾,洗脱体积增大;长径比过小将导致样品与填料接触时间短,吸附不充分,填料吸附蛋白量小。
3、若上样液中抗体浓度过高,应使用平衡缓冲液稀释至1-2 mg/ml,抗体浓度过高影响柱效。
4、可以采用降低上样时的流速来增加样品与填料接触时间从而提高纯化抗体量。
5、凝胶用低pH缓冲液洗脱时间应尽可能短,洗脱后用中性缓冲液尽快中和至pH中性,以延长亲和介质的使用寿命。
6、洗脱后,应立刻用如中和缓冲液将收集到的抗体溶液中和到中性(pH7.4左右),以利于维持抗体的生物活性,避免抗体失活。
7、填料使用后应用0.1 M柠檬酸*缓冲液(pH3.0)做再生处理,长期采用极端的洗脱条件将缩短亲和介质的使用寿命。
使用方法:
I 缓冲液的准备
1、平衡缓冲液:纯化不同动物和不同亚型抗体时所用平衡缓冲液是不同的,部分参照如下。
抗体 | 平衡缓冲液成分 |
人IgG1、人IgG2、小鼠IgG2a、小鼠IgG2b | 20 mM PBS,300 mM NaCl,pH7.4-8.5 |
人IgG3、人IgG4、小鼠IgG1、大鼠IgG3 | 50 mM Tris-Cl,3 M NaCl,pH7.8-8.5 |
组份 | 2500U |
BloodTaq DNA Polymerase,5 U/μl | 5×100μl |
BloodTaq PCR Buffer, 10× | 5×1.8ml |
试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
BloodTaq DNA Polymerase | 1μl | |
BloodTaq PCR Buffer, 10× | 5μl | 1× |
dNTP Mix,2.5 mM each | 4μl | 200μM each |
Forward Primer(10μM) | 2μl | 0.4μM |
Reverse Primer(10μM) | 2μl | 0.4μM |
全血 | ≤10% | |
RNase-Free water | xμl | |
Total | 50μl |
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 95℃ | 5 min | |
变性 | 95℃ | 30 s | 35-40 个循环 |
退火 | 50-68℃ | 30 s | |
延伸 | 72℃ | 250-500 bp/min | |
终延伸 | 72℃ | 10 min |
组份 | 0.1ml×10支 |
DH5α Competent Cell | 10×100μl |
Control DNA pUC19,0.1ng/μl | 10μl |
北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒,更多试剂产品需求,欢迎来电咨询选购WE0271型Protein A琼脂糖凝胶优惠。
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