RNA/DNA病毒基因组提取试剂盒 DNA纯化

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")RNA/DNA病毒基因组提取试剂盒 DNA纯化，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：RNA/DNA病毒基因组提取试剂盒 DNA纯化
编号：XH008
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
原理简介
本试剂盒适合于从血清、细胞上清、淋巴液中提取RNA病毒基因组，也可用于DNA病毒基因组的提取。本试剂盒利用蛋白酶K破开病毒外壳，放出RNA/DNA，用玻璃奶吸附达到纯化目的。
使用本试剂盒提取的RNA/DNA可用于各种常规操作，包括RT-PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
注意事项
1．一般病毒含量过低，最后提取的基因组RNA/DNA电泳无法检测到，但RT-PCR/PCR等其他实验还会有结果。
2．同一样本，如果想大量提取，可以增加样本量，并且每一步试剂加量，但使用次数会成倍减少。
3． 所有离心步骤最好用低温离心机在4℃条件下离心，如果实验室没有低温离心机，也可以使用常温离心机，但所提得的RNA可能会降解严重些。
操作步骤
准备工作：使用前请先开启一瓶新的无水乙醇，倒入漂洗液中，倒满至离瓶口约0.5-1ml，盖上瓶口，摇匀。
1、 取病毒上清液0.5ml，12000rpm离心5min，尽量取上清使用，弃去沉淀。
2、 向病毒上清中加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K，充分混匀，65℃消化10-20min，期间可颠倒离心管混匀数次。
3、 向管中加入500ul结合液，充分混匀。
4．玻璃奶摇匀。加入25ul摇匀的玻璃奶，混匀，室温放置2分钟，10000转/分钟离心1分钟，去上清；沉淀加入800ul漂洗液，振荡混匀，10000转/分钟离心1分钟，去上清，再用600ul漂洗液洗一次。去上清，再次离心2分钟，用小吸头吸去上清。
7．室温放置10分钟，加入30－50ul洗脱缓冲液混匀溶解，静置5分钟。离心，取上清为所提RNA。

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·SYBR Green I(10000×)电泳用
编号：XH019
规格：100ul
SYBR Green I是高灵敏的DNA荧光染料，适用于各种电泳分析，操作简单：无须脱色或冲洗。至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。SYBR Green I 与dsDNA结合荧光信号会增强800-1000倍，用SYBR Green I染色的凝胶样品荧光信号强，背景信号低。可适用于多种电泳分析。
SYBR Green I适合于多种凝胶电泳方法：琼脂糖凝胶，聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳，脉冲电场凝胶电泳，和毛细管电泳等。
SYBR Green I与双链DNA的亲和力非常高，因此可以用做电泳前染色，对分子生物学中常用的酶（如：Taq酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等）没有抑制作用。另外，SYBR Green I与EB相比，诱变能力大大降低。
SYBR Green I核酸染料特点
高灵敏：至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。
信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。
操作简单：无须脱色或冲洗。
适用范围广：可适用于多种电泳分析。
使用方便：不影响其它修饰酶作用。
安全性高：分子克隆上明确诱变能力很低
使用方法
SYBR Green I预染方法
1. 该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳
2. 工作液的配制：用电泳缓冲液将10000×的SYBR GreenⅠ稀释100倍，即为SYBR GreenⅠ工作液。SYBR GreenⅠ工作液可以置2-8℃冷藏一个月以上。
3. 制胶：按常规方法制胶，不含任何染料。
4. 样品染色：向分析样品中加入SYBR GreenⅠ工作液和载样缓冲液，室温放置10分钟，使SYBR GreenⅠ与样品中DNA充分结合。SYBR GreenⅠ工作液加入量为总上样量的1/10。
5. DNA Marker染色：将5μL DNA Marker和1μLSYBR GreenⅠ工作液混匀，室温放置5分钟，使SYBR GreenⅠ与DNA充分结合。（商品Marker最好稀释2-5倍后再电泳，否则电泳条带会变形，特别是大片段。）
6. 上样、电泳：按常规操作。
SYBR Green I后染方法
1. 按照常规方法进行电泳。
2. 用PH=7.0-8.5的缓冲液（如：TAE，TBE或TE），按照10000：1的比例稀释SYBR GreenⅠ浓缩液，混匀，制成染色溶液。
3. 将染色溶液倒入合适的聚丙*(代"烯")容器中，放入凝胶，用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10-30分钟，染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙*(代"烯")酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色，将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上，让工作液均匀地覆盖整个胶板，并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理（避免染料吸附在玻璃表面上）。
4. 用紫外仪观测。
SYBR Green I使用注意事项
1. 在"SYBR GreenⅠ预染色方法"中，电泳时间不要超过2小时，否则SYBR GreenⅠ会从DNA上分离出来，会产生弥散状条带。
2. 在常规用酒精沉淀核酸的过程中，SYBR Green I可以全部从双链核酸上去掉。
3. 如果想对用 SYBR Green I 染过的胶进行Southern blots，建议在预杂化和杂化溶液中加入0.1%- 0.3%的SDS。
4. 在紫外照射透视下，与双链DNA接合的SYBR Green I呈现绿色荧光。如果胶中含有单链DNA则颜色为橘黄而不是绿色。
5. SYBR Green对玻璃和非聚丙*(代"烯")材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙*(代"烯")类容器。


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