SABC免疫组化试剂盒(兔IgG)(POD显色) 蛋白质研究

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

SABC免疫组化试剂盒(兔IgG)(POD显色) 是高品质的蛋白质研究产品，由北京百奥莱博供应，用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多SABC免疫组化试剂盒(兔IgG)(POD显色)等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。

名称：SABC免疫组化试剂盒(兔IgG)(POD显色) 蛋白质研究
英文名：SABC(Rabbit IgG)-POD Kit
规格：100T
编号：QN1229
品牌：百奥莱博
本试剂盒适合于一抗为兔IgG的免疫组化实验，DAB显色。

试剂盒组份：
封闭液(5% BSA)——————————10mL
3% H2O2-—————————————10mL
Bio-羊抗兔IgG浓缩液-———————100μL
SABC-POD浓缩液——————————100μL
稀释液——————————————30mL
20×DAB显色液A——————————1mL
20×DAB显色液B——————————1mL

ABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10)，经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin-Biotin Complex，SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物，大量的酶将保证SABC具有很高的敏感性。

操作步骤:(以石蜡切片为例)
1、切片常规脱蜡至水(三次二甲*，三次乙醇)。
2、3% H2O2室温处理5-10分钟以灭活内源性过氧化物酶，蒸馏水洗3次。
3、可选步聚：
a、热修复抗原，将切片浸入0.01M柠檬酸*缓冲液(pH 6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS(pH 7.2-7.6)洗涤1-2次。
b、酶消化，滴加消化液，37℃放置10分钟，PBS(pH7.2-7.4)洗涤2-3次。
c、跳过此步，直接进入下一步。

4、滴加5% BSA封闭液，室温20分钟，甩去多余液体, 免洗。
5、用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周)，也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃ 孵育1小时左右或20℃ 孵育2小时左右，也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2分钟(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间)。
6、根据用量，用稀释液将Bio-羊抗兔IgG浓缩液按1:50-100稀释成工作液(1mL稀释液加入10-20μL Bio-羊抗小鼠IgG浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。 滴加Bio-羊抗兔IgG工作液， 20-37℃孵育30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2分钟。
7、根据使用量，用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1mL稀释液加入10μL SABC-POD浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加SABC-POD工作液，20-37℃孵育30分钟。PBS (pH7.2-7.4)洗涤4次，每次5分钟。
8、DAB显色：根据用量，用PBS(pH7.2-7.4)配制，按1mL PBS加入50μL 20×DAB显色液A，加入50μL 20×DAB显色液B 。充分混匀后滴加到切片上，室温显色，镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9、苏木素轻度复染。脱水，透明，封片。显微镜观察。

对于细胞爬片，固定后，PBS漂洗两次，再用0.5% Triton X-100室温孵育20分钟，PBS漂洗两次，3% H2O2处理15分钟;PBS漂洗两次，接上述第4步。
对于冰冻切片，固定后，PBS漂洗两次，接上述第二步。

注意事项：如果染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前，用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。

我公司的SABC免疫组化试剂盒(兔IgG)(POD显色) 蛋白质研究，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·k-卡拉胶
编号：QN0702
英文名称：K-Carrageenan Karra Type
规格：25g|100g
别名：卡拉胶III
CAS号：11114-20-8

·腐胺
编号：QN0642
英文名称：1,4-Diaminobutane
规格：5g
别名：腐肉胺
分子式：C4H12N2
分子量：88.15
纯度：≥99% (TLC)
性状：无色至黄色油状液体
沸点：158℃
密度：0.877g/ml
储存条件：室温干燥避光

·内毒素去除剂
编号：QN0915
英文名称：Endotoxin Erasol(for DNA solution)
规格：20ml|100ml
本公司生产的内毒素清除剂主要用于清除DNA、蛋白质或其他液体样品中的内毒素。在特定的pH值、盐浓度和温度条件下，内毒素清除剂能与DNA、重组蛋白以及液体样品中的内毒素特异性结合，经过室温高速离心后，DNA或蛋白质等保留在水相，而内毒素则被浓缩到极小体积的下层相而被清除。经过3次以上重复抽提后可将活性为5000～50000 EU/ml的内毒素水平降低到5～0.5 EU/ml以下，即降低1000～10000倍。

储存条件：-20℃

·L-乳酸脱*酶
编号：QN0484
英文名称：L-Lactic Dehydrogenase
规格：2.5KU
本L-乳酸脱*酶常用于检定丙*(代"酮")酸盐。

别名：L-LDH
CAS号：9001-60-9
分子量：140kDa(由四个亚基组成)
性状：类白色冻干粉或硫*(代"酸")铵的结晶悬浮液
类型：Type II
酶活性：≥300U/mg
pI：8.4～8.6
最适pH：7.5
储存条件：2～8℃

单位定义：37℃，pH 7.5，每分钟将1.0 μmol 丙*(代"酮")酸还原成L-乳酸的酶量为1单位。


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·黄体*(代"酮")
编号：QN0233
英文名称：Progesterone
规格：5g
黄体*(代"酮")生理功能：
1.维持雌性动物的妊娠，并导致妊娠动物出现一系列的生理变化， 如抑制母畜发情。
2.促进子宫粘膜层增厚、腺体的弯曲度以及分泌机能的增加。
3.抑制子宫的蠕动，并使子宫颈收缩，分泌粘稠液体等。这些生理变化为早期胚胎的运行、生长发育、附植以及附植后胎儿的继续生长提供适宜的环境条件。
4.少量孕激素与雌激素协同，促进母畜发情。孕激素与催乳素协同，可促进乳腺腺体的发育。
5.孕激素参与下丘脑和垂体前叶的反馈调节， 使动物生殖激素的分泌协调平衡。体内含量，各种家畜卵泡期孕酮含量低于1毫微克/毫升，牛在黄体期约4毫微克/毫升，妊娠期约18毫微克/毫升。

别名：黄体素;孕酮;激孕酮;助孕素;孕酮,黄体*(代"酮");孕烯二酮
CAS号：57-83-0
分子式：C21H30O2
分子量：314.47
储存条件：阴凉干燥
纯度：AR
性状：结晶粉末

·潮霉素B
编号：QN0023
英文名称：Hygromycin B
规格：1g
本品常用做蛋白质合成抑制剂，可用于植物细胞培养等生化研究。本品是潮霉素B干粉，用于细胞培养实验溶解后过滤除菌。推荐溶剂水，PBS溶液。

CAS：31282-04-9
储存条件：-20℃
别名：湿霉素乙;效高素;潮霉素B干粉
效价：≥950U/mg

潮霉素B是由吸水链霉菌代谢产生的一种*基糖苷类抗生素，通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成，从而杀死原核(如细菌)、真核(如酵母菌，真菌)和高等哺乳动物真核细胞。

大肠杆菌来源的潮霉素抗性基因(hyg或hph)，编码潮霉素B磷酸转移酶，将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物，从而起到解毒作用。针对这一原理，潮霉素B是一种非常有用的选择性标记，用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。另外，由于作用模式的差异，常与G418，Zeocin™ 和Blasticidin S联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择。潮霉素B还能用作抗病毒剂，因其选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞，且具有抑制翻译的功效。还可混合入动物饲料中起到驱虫功能。

使用方法

1. 常用筛选浓度
注意：潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。

2. 杀灭曲线的建立
注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度，可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现，至少选择5个浓度。
1)第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜;注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2)根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。

终浓度(μg/mL)	培养基体积(ml)	5mg/ml潮霉素B加入体积(ml)
50	9.9	0.1
100	9.8	0.2
250	9.5	0.5
500	9.0	1.0
750	8.5	1.5
1000	8.0	2.0

3)第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4)接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5)按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的最低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

3. 稳定转染细胞的筛选
1)转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果最好。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%。
2)每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3)筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4)挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5)之后更换正常培养基培养即可。

注意事项：
1)潮霉素B的抗性基因(hyg或hph)除了来自大肠杆菌之外，还发现于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
2)本品为有毒化合物，避免与皮肤和眼睛接触，请小心操作。
3)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


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·羟甲基二茂铁
编号：QN0827
英文名称：Ferrocenemethanol
规格：5g
CAS号：1273-86-5

·N-羟基丁二酰亚胺
编号：QN0612
英文名称：N-Hydroxysuccinimide NHS
规格：25g
本品常用于制备半合成卡那霉素。

别名：N-羟基丁二酰亚胺
CAS号：6066-82-6
分子式：C4H5NO3
分子量：115.09
性状：白色结晶体
储存条件：2～8℃

·甘油明胶封片剂
编号：QN1246
英文名称：Glycerol Gelatin aqueous slide mounting medium
规格：10ml
甘油明胶封片液是一种参考经典的 Kaiser 方法配制的水性封片液，但经过改良，不再含剧毒*酚，可以用于常规的各种切片、涂片等的封片。本甘油明胶封片液中的主要有效成分为明胶和甘油。

·蒽醌
编号：QN0860
英文名称：Anthraquinone
规格：25g
CAS号：84-65-1
分子式：C14H8O2
分子量：208.21
性状：黄色针状结晶。 溶于乙醇、乙*(代"醚")和丙*(代"酮")，不溶于水。
储存条件：RT

·重组牛肠激酶
编号：QN0414
英文名称：Enterokinase from bovine intestine
规格：100U
肠激酶是一种高纯度的重组牛肠激酶。该酶经HPLC纯化，纯度高，特异性高，并且不含其他蛋白酶。肠激酶(EC3.4.21.9)是一个特定的蛋白酶，它可以切割前面含有四个天冬*酸的赖*酸羧基端位点：天冬*酸-天冬*酸-天冬*酸-天冬*酸-赖*酸。肠激酶可去除位于蛋白质N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签。

分子量：25850Da
储存条件：-20℃保存
酶活：10U/ul

·X-gal(β-半乳糖苷酶发色底物)
编号：QN1050
英文名称：5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-Beta-D-Galactopyranoside
规格：100mg|1g
本品常作为β-半乳糖苷酶的发色底物用于蓝白斑重组细菌的筛选实验。

CAS号：7240-90-6
分子式：C14H15BrClNO6
分子量：408.64
储存条件：-20℃
纯度：≥99%
性状：白色粉末
溶解性：溶于DMF，参考浓度20mg/ml。

·*啶酮酸
编号：QN0085
英文名称：Nalidixic Acid
规格：10g
本品是细菌DNA合成酶和鸟类成骨髓细胞瘤病毒反转录酶的抑制剂。主要对革兰阴性菌有效，对大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及变形杆菌等，具抑菌和杀菌作用。

CAS：389-08-2
分子式：C12H12N2O3
分子量：232.24
储存条件：室温干燥保存
纯度：＞98%
性状：白色或类白色结晶性粉末

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