SABC免疫组化试剂盒(兔IgG)(FITC显色)现货

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名称：SABC免疫组化试剂盒(兔IgG)(FITC显色)现货
规格：100T-200T
编号：QN1227
英文名：SABC(Rabbit IgG)-FITC Kit
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
本试剂盒适合于一抗为兔IgG来源的免疫组化实验，FITC荧光检测。

试剂盒组份：
封闭液(5% BSA)——————————10ml
Bio-羊抗兔IgG浓缩液-———————100ul
SABC-FITC浓缩液-—————————100ul
稀释液——————————————30ml
抗荧光衰减封片剂—————————10ml

SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质(IP=10)，经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex，SABC大约可形成一百个左右的FITC和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的FITC将保证SABC具有很高的敏感性。

操作步骤：(以石蜡切片热修复为例)
1. 切片常规脱蜡至水。
2. 可选步聚：
a、热修复抗原，将切片浸入0.01M 柠檬酸*缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10min后，反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.4)洗涤1-2次。
b、酶消化，滴加消化液，37℃10min，PBS(pH7.2-7.4)洗涤2-3次。
c、跳过此步，直接进入下一步。
3. 滴加5% BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 免洗。
4. 用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周)，也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗，37℃ 孵育1h左右或20℃ 2h左右，也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2min(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间)。
5. 根据使用量,用稀释液将Bio-羊抗兔IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul Bio-羊抗兔IgG浓缩液,混匀即成工作液，此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗兔IgG工作液，20-37℃孵育30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2min。
6. 根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-FITC浓缩液，混匀即成SABC-FITC工作液，此工作液4℃可保存一周)。滴加SABC-FITC工作液，20-37℃孵育30min(避光)。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次，每次5min。
7. 滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。

对于细胞爬片，固定后，PBS漂洗两次，再用0.5% Trxiton X-100室温孵育20min， PBS漂洗两次，接上述第3步。
对于冰冻切片，固定后，PBS漂洗两次，再接上述第2步。

注意事项：如果背景过高，在SABC反应之后，用加有0.01%—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次，PBS洗2次，然后封片观察。

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·胰蛋白酶(1:250)
编号：QN0460
英文名称：Trypsin
规格：25g|100g
在组织细胞的体外培养和原代细胞培养中的组织细胞分散(将组织块制备成单个细胞悬液)以及传代细胞培养中，贴壁生长细胞的消化分散均要使用组织细胞消化液。常用的消化液为胰蛋白酶，EDTA等，其功能主要是使细胞间的蛋白质(如细胞外基质)水解，使组织或贴壁细胞分散成单个细胞，制成细胞悬液用于进一步的实验。

别名：结晶胰蛋白酶;胰蛋白酵素;胰酶
CAS号：9002-07-7
储存条件：2～8℃
酶活：250.N.F.U/mg
性状：白色或类白色粉末

·DNA退火缓冲液(5X)
编号：QN1032
英文名称：Annealing Buffer for DNA Oligos,5×
规格：5ml
DNA退火缓冲液即DNA寡核苷酸退火缓冲液，该退火缓冲液不仅可以用于常规的DNA Oligo的退火，而且特别适合于较难退火的用于siRNA质粒构建的DNA Oligo的退火。使用DNA退火缓冲液(5×)可以有效避免DNA Oligo自身形成发夹结构，并且两条Oligo退火后可以直接和经酶切纯化的质粒连接。通常转化后可以得到大量的阳性克隆。

使用本试剂操作非常简单，只需把待退火的DNA Oligo和DNA退火缓冲液(5×)按照一定比例混合后，置于PCR仪上，约60分钟即可完成。

储存条件：-20℃，有效期至少12个月。

·总RNA提取试剂盒
编号：QN0926
英文名称：Total RNA Extraction Kit
规格：50T|100T
操作步骤：

1. 样品处理：
a. 植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
b. 动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
c. 贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。
d. 细胞悬液：离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。
e. 血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1ml裂解液混匀。
2. 将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。
3. 向匀浆样品中加0.2ml*仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。
4. 2～8℃ 12000rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。
5. 吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul 洗柱液，室温放置2分钟，2～8℃ 12000 rpm离心2min，弃废液。
6. 第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2～8℃ 12000rpm离心2min，弃废液。
7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2～8℃ 12000rpm离心2min，弃废液。
8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液，2～8℃ 12000rpm离心2min，弃废液。
9. 12000rpm离心2min，弃掉收集管，将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。
10. 将吸附柱放入新管中，向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O，室温放置5min，12000rpm室温离心2min即得到RNA。

注意事项：
1，所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。
2，RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯，需电泳检测。

储存条件：2～8℃

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