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室温(15~30℃)
长期
NoEndo Plasmid Maxi Kit
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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产供应高效无内毒素质粒大量提取试剂盒说明书,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应高效无内毒素质粒大量提取试剂盒说明书,产品信息:
类别:DNA纯化
英文名:NoEndo Plasmid Maxi Kit
产品名 | 产品编号 | 包装规格 |
高效无内毒素质粒大量提取试剂盒 | WE0167 | 2次|10次 |
规格:2次|10次
品牌:百奥莱博
编号:WE0167
英文名:NoEndo Plasmid Maxi Kit
产地:国产|进口
本试剂盒提供一种简单快捷高效提取无内毒素质粒的新方法,在碱裂解法裂解细胞的基础上,采用独特的硅基质膜吸附技术,高效专一结合质粒DNA;同时采用特殊的缓冲液系统和除内毒素过滤器,有效去除内毒素、基因组DNA、RNA、蛋白等杂质。本试剂盒所得质粒纯度高、提取量大,特别适用于细胞转染,同时也可用于DNA测序,PCR,体外转录,内切酶消化等实验。
为什么使用本试剂盒?:内毒素是质粒提取中常见的污染物,由于真核细胞对内毒素非常敏感,因此,如果质粒中含有内毒素会大大降低真核细胞转染效率。
试剂盒组成:
组份 | 2次 | 10次 |
Buffer P1 | 30ml | 125ml |
Buffer P2 | 30ml | 125ml |
Buffer E3 | 30ml | 125ml |
Buffer PS | 15ml | 30ml |
Buffer PW(浓缩液) | 10ml | 50ml |
Endo-Free Buffer EB | 10ml | 30ml |
RNase A(10 mg/ml) | 600μl | 2ml |
推柄 | 2个 | 10个 |
内毒素过滤器FQ | 2个 | 10个 |
吸附柱DQ及收集管 | 2套 | 10套 |
离心管(50ml) | 2个 | 10个 |
自备试剂:无水乙醇、异丙醇。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、所有组分可在干燥、室温(15~30℃)环境稳定保存1年,将吸附柱置于2~8℃可保存更长时间,加入RNase A的Buffer P1 置于2~8℃可稳定保存6个月。
2、Buffer P1 在使用前先加入RNase A(将试剂盒中提供的RNase A 全部加入),混匀,置于2–8℃保存。使用前需在室温中放置一段时间,恢复至室温后使用。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前请先检查Buffer P2 和Buffer E3是否出现结晶或沉淀,如有结晶或沉淀现象,可在37℃水浴几分钟,即可恢复澄清。
5、注意Buffer P2和Buffer E3含有刺激性物质,请戴手套操作,使用后应立即盖紧盖子。
6、使用Buffer PS处理过的吸附柱最好立即使用,避免放置时间过长影响使用效果。
7、提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。
操作步骤:
1、取150ml过夜培养的菌液,加入离心管(自备)中,12000×g离心2-3分钟收集细菌,尽量吸弃全部上清。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入12ml Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A),使用移液器或涡旋振荡器充分混匀,悬浮细菌沉淀。
注意:如果菌块未彻底混匀,将会影响裂解效果,使提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入12ml Buffer P2,温和地上下颠倒混匀8-10次,使菌体充分裂解,室温放置3-5分钟。此时溶液应变得清亮粘稠。
注意:温和混匀,不要剧烈震荡,以免打断基因组DNA,造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。如果溶液未变得清亮,提示可能菌量过大,裂解不彻底,应减少菌体量。
4、向离心管中加入12ml Buffer E3,立即上下颠倒混匀8-10次,此时出现白色絮状沉淀,室温放置5分钟。12000×g离心10分钟,将上清全部倒入除内毒素过滤器中,慢慢推动推柄(Plungers)过滤,滤液收集在干净的50ml离心管(自备)中。
注意:Buffer E3 加入后应立即混匀,避免产生局部沉淀。
5、向滤液中加入0.3倍滤液体积的异丙醇,上下颠倒混匀。
注意:加入异丙醇过多容易导致RNA污染。
6、柱平衡:向已装入收集管中的吸附柱中加入2ml Buffer PS,12000×g离心2分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7、将步骤5中滤液与异丙醇的混合溶液转移到平衡好的吸附柱(已装入收集管)中。
8、6000-12000×g离心2分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
注意:吸附柱的最大容积为15ml,所以第7步中所得溶液分多次过柱。如果离心机转子倾角较大时,建议加入吸附柱的溶液体积不超过10ml,以防发生漏液现象。
9、向吸附柱中加入10ml Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇),6000-12000×g离心2分钟,倒掉收集管中的废液。
10、重复步骤9。
11、将吸附柱重新放回收集管中,12000×g离心5分钟,倒掉废液,将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干吸附柱中残余的漂洗液。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱置于一个新的离心管中,向吸附膜的中间部位加入1-3ml Endo-Free BufferEB,室温放置2-5分钟,12000×g离心5分钟,将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
注意:
1)为了增加质粒的回收效率,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置2-5分钟,12000×g离心5分钟,将质粒溶液收集到离心管中。
2)质粒拷贝数较低或>10 kb时,Endo-Free Buffer EB在65-70℃水浴预热,可以增加提取效率。
储存条件:室温(15~30℃)
高效无内毒素质粒大量提取试剂盒说明书专业优质供应商:北京百奥莱博科技有限公司
关键词:高效无内毒素质粒大量提取试剂盒,NoEndo Plasmid Maxi Kit,WE0167
我公司始终坚持“创新,品质,服务,节约,敬业,感恩”的理念。吸收新创意,严把质量关口,全方位的服务跟踪,坚持做出高品质产品。本着“追求、员工、技术、精神、利益”的宗旨。现拥有一批精干的管理人员和一支高素质的专业技术队伍。我们以质量为生命、时间为信誉、价格为竞争力的经营信念,立足于国内外市场。目前已在全国各大院系,和研究单位均有销*(代"售"),也得到了客户的认可。百奥莱博生产的高效无内毒素质粒大量提取试剂盒等试剂进入飞速发展期,为了更好的服务客户,公司长期储备海量库存,以此助推中国科技的快速发展,更好的造福人类!
更多有关高效无内毒素质粒大量提取试剂盒说明书的价格及使用说明等,请联系我们的业务经理王欣女士咨询,我公司还销*(代"售")以下产品:
编号 | 类别 | 名称 |
WE0168 | 核酸电泳和回收 | 琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 |
WE0370 | HRP标记抗体 | HRP标记驴抗鸡IgY(IgG)(H+L) |
WE0312 | 蛋白质研究 | PBS(pH7.5,10×) |
WE0340 | 一抗 | 抗VSV-G标签单克隆抗体 |
WE0350 | 一抗 | 抗HA标签多克隆抗体 |
WE0372 | HRP标记抗体 | HRP标记驴抗山羊IgG(H+L) |
WE0220 | 其他分子生物学试剂 | X-gal溶液(20mg/ml) |
WE0252 | 克隆与表达 | DH5α感受态细胞 |
WE0265 | 蛋白质研究 | 细胞核/浆蛋白抽提试剂盒 |
WE0290 | 蛋白质研究 | G250蛋白快速染色试剂 |
WE0402 | DNA纯化 | 唾液DNA样本保存管 |
WE0383 | 二抗 | Cy3标记山羊抗小鼠IgG(H+L) |
WE0200 | RNA纯化 | 植物RNA提取试剂盒(含DNase I) |
WE0386 | 免疫检测 | HRP标记链霉亲和素 |
WE0382 | 二抗 | RRX标记山羊抗兔IgG(H+L) |
WE0276 | 蛋白质研究 | BCA蛋白定量试剂盒 |
WE0353 | 一抗 | 抗β-Actin单克隆抗体(植物) |
WE0300 | 蛋白质研究 | PVDF膜(0.22μM) |
WE0363 | HRP标记抗体 | HRP标记兔抗绵羊IgG(H+L) |
WE0152 | 核酸扩增(PCR) | 快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)(低含量ROX校正染料) |
WE0235 | 基因结构和功能 | 双链DNA荧光定量试剂盒 |
WE0109 | 核酸扩增(PCR) | Babuddy超保真DNA聚合酶 |
WE0201 | RNA纯化 | 血清血浆尿液游离RNA提取试剂 |
北京百莱博科技有限公司专业生产DNA纯化产品,欢迎来电咨询选购高效无内毒素质粒大量提取试剂盒说明书。
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