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DNA 拓扑异构酶 I
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一年
DNA Topoisomerase I
大量
上海沪震实业有限公司
100U盒
DNA 拓扑异构酶 I产品及特点:
DNA Topoisomerase I(DNA 拓扑异构酶 I)来源于小牛胸腺,与来源于原核生物的酶性质不同,在无Mg2+的条件下也具有活性。而且,原核生物的DNATopoisomerase I只作用超螺旋分子的负链,而本酶则能使来源于超螺旋分子正负链均形成松散型,DNA Topoisomerase I催化4种反应:
1. 使环状超螺旋分子的超螺旋解开。
2. 在单链环状DNA分子内形成绳结(Knotting)和解开绳结(Unknotting)。
3. 催化具有互补碱基序列的环状单链DNA形成双链闭环状DNA分子。
4. 2个环状双链DNA分子之中的一个存在DNA链的切口时,发生两个分子的连结反应(Catenation)或者逆反应(Decatenation)。
DNA 拓扑异构酶 I反应条件
1X Buffer+BSA [50 mM KAc,20 mMTris-Ac,10 mM Mg(Ac)2,1 mMDTT (pH 7.9 @ 25℃)]。加入 100 μg/ml BSA。37℃ 温育。
Buffer 成分
10 mM Tris-HCl,35 mM (NH4)2SO4,50 mM KCl,1 mM DTT,0.1 mMEDTA,50% Glycerol,pH 7.5 @ 25℃
DNA 拓扑异构酶 I备注
1. pBR322 DNA和φX174 DNA的RF I(超螺旋分子)用DNA Topoisomerase I反应后电泳,胶中含溴乙锭(EB)时,反应前后DNA带的位置不发生变化。这是因为由DNA Topoisomerase I作用而转换为松散型的DNA受EtBr的影响,再次变为超螺旋状态。因此,使用Topoisomerase I反应后,一般使用不含EB的琼脂糖凝胶电泳,电泳终了后再用EB染色。
2. 如果在10×添附Buffer中直接加入0.1%小牛血清白蛋白溶液,会产生大量的白色沉淀。因此,在反应液调制时需按以下顺序添加试剂:dH2O→10×反应缓冲液→0.1% BSA→底物DNA。
3. BSA在-20℃下易产生沉淀,应尽量避免多次反复冻融。短期使用请在4℃下保存。产生稍许沉淀不影响反应效果。
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