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热敏磷酸酶
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一年
Antarctic Phosphatase
大量
上海沪震实业有限公司
500U盒
热敏磷酸酶产品及特点:
本产品是从南极微生物中克隆并在大肠杆菌中表达的热敏磷酸酶,它能催化除去 DNA 或 RNA 末端的5′磷酸基团。由于磷酸酶处理后的 DNA 片段缺少连接酶所要求的5′磷酸末端,因此它们不能进行自连接。这个特性可以在克隆时降低载体DNA的背景。具体有下列特点:1. 除去 DNA、RNA、rNTPs 和 dNTPs 5' 末端的磷酸基团2. 防止克隆载体的自连接3. 蛋白质丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的去磷酸化4. 为 5' 末端标记准备模板5. 去除 PCR 产物中的 dNTP 和焦磷酸盐6. 65℃ 加热 5 分钟可使酶完全失活热敏磷酸酶活性单位定义1 单位指在 37℃ 条件下,30 分钟能使1 μg 经 HindIII (产生 5' 突出末端) 、EcoRV (产生平齐末端) 或 PstI (产生 5' 凹陷末端) 消化的 pUC19 DNA 去磷酸化所需的酶量。去磷酸化标准是指在自连接反应中能抑制 > 95% 的 DNA 再环化 (通过转化 E. coli 细胞来检测) 。反应条件1× 热敏磷酸酶反应缓冲液 [50 mM Bis Tris-丙烷 HCl,1 mM MgCl2,0.1 mM ZnCl2 (pH 6.0 @25℃)]。37℃ 温育。热失活65℃ 5分钟。
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