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- HZbscience
- 中国/上海
- HZ140630-20
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温运输，4℃避光保存
- 保质期：
半年
- 英文名：
Apoptosis Detection Kit
- 库存：
大量
- 供应商：
上海沪震实业有限公司
- 规格：
20次盒
细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。在细胞凋亡过程中，细胞内膜的磷酯酰丝氨酸外翻到细胞外膜，而Annexin V（膜联蛋白V）对其有天然的高亲和能力，故可以用荧光素594标记的Annexin V作为荧光探针来检测细胞凋亡。本产品即是基于Annexin V-荧光素594的凋亡细胞荧光显微镜检测试剂盒。其原理图如下：
本产品具有下列特点：
1. 即开即用，不需要专门花时间准备各种成分。
2. Annexin V-荧光素594红色荧光激发波长590nm，最大发射波长617nm。
3. 本产品为荧光显微镜检测专用细胞凋亡检测试剂盒。
4. 本产品适用于培养细胞（悬浮或贴壁），不适用于组织样品。
细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-荧光素594）使用及效果
悬浮细胞：2000rpm离心5分钟，收集悬浮细胞。PBS洗涤细胞，2000rpm离心5分钟，收集1~5×105（悬浮）细胞。取500 μL溶液A悬浮细胞，加入5 μL溶液B，混匀，室温避光反应5-15分钟。一小时内荧光显微镜下观察检测。贴壁细胞：贴壁细胞直接去除培养基上清。PBS洗涤细胞（300μL/96孔板每孔；1mL/6孔板每孔）。取溶液A加入到孔板内，96孔板每孔100μL；6孔板每孔500μL。加入溶液B，96孔板每孔1μL；6孔板每孔5μL。混匀，室温避光反应5-15分钟。去除孵育液，更换新鲜的PBS覆盖细胞。一小时内荧光显微镜下观察检测。
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文献和实验易造成细胞膜损伤而出现细胞坏死的假阳性，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-荧光素的结合从而干扰对于细胞凋亡的检测。同时，胰酶细胞消化液中应尽量不含EDTA，因为EDTA可能会影响Annexin V与磷脂酰丝氨酸的结合。 加入步骤1中收集的细胞培养液，将细胞轻轻吹打下来，转移到离心管内，300 g离心5 min，弃上清，收集细胞，用PBS洗涤细胞一次，轻轻悬浮细胞并计数。 注意：加入细胞培养液非常重要，一方面可以收集已经悬浮的发生凋亡或坏死的细胞，另一方面细胞培养液中的血清
示例： Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左)或未加药 (右)处理4h，FITC-Annexin V/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后，流式细胞仪荧光检测。 Annexin V-FITC单阳性细胞为早期凋亡细胞，Annexin V-FITC和PI染色双阳性的细胞为坏死细胞或者晚期凋亡。PI单染色阳性位裸核细胞。 实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况，检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。 流式检测细胞凋亡的数据分析方法： 1） 选中所有颗粒，将FSC
磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素（FITC、PE）或biotin标记，以标记了的Annexin-V作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。 碘化丙啶(propidine iodide
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