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- HZbscience
- 中国/上海
- HZ140623-20
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温运输，4℃避光保存
- 保质期：
一年
- 英文名：
Double-Stain Apoptosis Detection Kit
- 库存：
大量
- 供应商：
上海沪震实业有限公司
- 规格：
20次盒
细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。在细胞凋亡过程中，细胞内膜的磷酯酰丝氨酸外翻到细胞外膜，而Annexin V（膜联蛋白V）对其有天然的高亲和能力，故可以用EGFP（绿色荧光）标记的Annexin V来检测细胞凋亡，但本方法的缺点是不能区分早期和晚期的凋亡细胞。早期和晚期的凋亡细胞的一个重要区别在于细胞膜的完整性（凋亡早期细胞没有丧失膜的完整性），故可以用碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）来染色加以区分。其原理图如下：
本产品就是整合了上述两种方法的高灵敏的细胞凋亡检测试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，不需要专门花时间准备各种成分。
2. 整合了Annexin V-EGFP和PI检测法的优点，提高了凋亡细胞检测的灵敏度和特异性，本方法是目前最灵敏的细胞凋亡检测方法。
3. 相比于FITC绿色荧光，EGFP绿色荧光稳定性更高，信号更强，不易淬灭。
4. 本产品和流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测兼容。
5. 本产品适用于培养细胞（悬浮或贴壁），不适用于组织样品。
双染细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-EGFP·PI）使用及效果
2000rpm离心5分钟，收集悬浮细胞；胰酶消化液（无EDTA）消化收集贴壁细胞。PBS洗涤细胞，2000rpm离心5分钟，收集1~5×105细胞。取500 μL溶液A悬浮细胞，加入5 μL溶液B，混匀，加入5 μL溶液C，混匀。室温避光反应10-20分钟。一小时内荧光显微镜下观察或流式细胞仪检测。
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文献和实验Annexin V-PI 双染法 在细胞凋亡的早期就有细胞膜表面破损发生。破损时凋亡细胞表面的磷脂腺丝氨酸(PS)可以从细胞内膜翻转至细胞的外膜。该过程发生在DNA片段化之前，因而检测PS的表达，能反映早期凋亡。AnnexinV是相对分子质量为35 000大小的Ca2+依赖的磷脂结合蛋白，对PS有很高的亲和性，并且可以与暴露于细胞外的PS相结合。利用这一原理，可以将AnnexinV标记荧光来识别早期的细胞凋亡。通常利用AnnexinV-FITC和碘化丙啶(P1)来区分凋亡和坏死细胞。PI
Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合，将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失，细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核，搭配Annexin V使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A．悬浮细胞： 按照实验方案进行凋亡诱导，300 g离心5 min，弃上清，收集细胞，用PBS洗涤细胞一次，轻轻重悬浮细胞并计数。 取1~5 ×
1．细胞收集：悬浮细胞直接收集10ml的离心管中，而帖壁细胞先用滴管轻轻吹打，调亡细胞一经吹打可能脱壁，收集到10ml的离心管中，没脱壁的细胞用0.02％的EDTA消化使之脱壁，每样本细胞数为（1～5）×106，500～1000r/min离心5min弃去培养液。 2．用孵育缓冲液洗1次，500～1000r/min离心5min。 3．用100μl的标记溶液重悬细胞，室温下避光孵育10～15min。 4．500～1000r/min离心5min沉淀细胞，孵育缓冲液洗1次。 5．
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