非变性PAGE蛋白上样缓冲液(5X)

免疫印迹法（immunobiotting test，IBT）

，需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同，需要采用适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大。更方便的方法是选用成套的裂解液和定量试剂盒测定蛋白质。如果浓度过高，可按比例稀释，读出蛋白浓度后，再折算回原样品浓度。 3. 电泳(Electrophoresis) 配制SDS-PAGE凝胶，在收集的蛋白样品中加入适量浓缩的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。使用5X的SDS-PAGE

Western blot 实验步骤及其注意事项

蛋白上样缓冲液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。使用5X的SDS-PAGE蛋 白上样缓冲液可以减小上样体积，在相同体积的上样孔内可以上样更多的蛋白样品。5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以参考相关文献资料配制，也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)。 100℃或沸水浴加热3-5分钟，以充分变性蛋白。

一篇搞定 IP、co-IP 实验

将目的蛋白从固相介质上洗脱下来，依据捕获方式和下游应用优化配方 如果诱饵蛋白或者靶蛋白带有标签，可用高浓度标签或配体进行竞争洗脱 温和的配方：0.1M 甘氨酸（pH2.5-3） 也可使用 SDS-PAGE 上样缓冲液直接洗脱 资源合集中有建议的对应不同洗脱环境的配方。 常见问题 1、Co-IP 背景较深或者条带杂乱 固相基质的非特异性结合— 抗体结合非特异的蛋白 洗涤不当造成杂带 建议方案：pre clear 或者更换磁珠；设置对照排除非特异性条带；优化缓冲液（学习视频中会有详细讲解