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- KALANG
- 中国/美国
- K237
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃恒温保存一年，感受态细胞于-80℃保存，有效期6个月
- 保质期：
1年
- 英文名：
StarMut Site-directed Mutagenesis Kit
- 库存：
大量
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 规格：
ml/盒
StarMut Site-directed Mutagenesis Kit采用反向PCR (Inverse PCR) 技术，对含有目标基因的双链环状质粒进行扩增，直接导入突变序列，从而实现单个或多个邻近碱基的置换(substitution)、缺失(deletion)或插入(insertion)。该技术的原理如图所示。首先以甲基化的质粒DNA为模板，使用人工合成含有目的突变碱基的引物进行扩增反应，然后用DpnI限制性内切酶消化不含突变的质粒模板，再进行转化和筛选。
本试剂盒使用的StarMut Enzyme及其配套buffer能够最大限度地保持扩增质粒的保真性，对引物设计的要求相对宽松、灵活，最多可实现21个连续碱基的插入或删除，适用于≤6 kb质粒的点突变。该方法操作简单快捷，突变阳性率高，严格按说明书操作，6个以下连续碱基的突变率可达90%以上。
StarMut Site-directed Mutagenesis Kit的原理和操作流程示意图
用途
• 6 kb以下质粒的单个或多个邻近碱基的置换（Substitution）、缺失（Deletion）、或插入（Insertion）
特点
• 操作简单：采用一步PCR法，不需要磷酸化引物，不需要连接反应，不需要特殊菌株
• 阳性率高：6个以下连续碱基的突变率可达90%以上
• 质控对照：提供Control Plasmid和Control Primers，通过X-gal琼脂平板呈色变化监控反应各组分的性能
• 提供针对高GC模板的High-GC Additive
产品组分
| StarMut Enzyme | 8μl |
| 10 x StarMut Reaction Buffer | 100μl |
| High-GC Additive | 30μl |
| StarMut dNTPs | 25μl |
| Dpn I（10 U/μl） | 12μl |
| Control Plasmid（5 ng/μl） | 10μl |
| Control Primers（10 μM of each） | 10μl |
| ddH2O | 1ml |
保存条件
-20℃恒温保存一年，感受态细胞于-80℃保存，有效期6个月
使用方法
1．设置PCR反应体系：
| Template Plasmid（5~10 ng/μl） | 1μl |
| 10 x StarMut Reaction Buffer | 2.5μl |
| Primer Mixture（10 μM of each） | 1μl |
| StarMut dNTPs | 2μl |
| ddH2O | 补足至25μl |
2．加入 0.5 μl StarMut Enzyme混匀，置于PCR仪中
3．按以下设置进行PCR：
4．加入1 μl Dpn I，37℃温育 1 hr
5．转化、培养
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文献和实验The ability to create defined mutations and to generate precise fusions of protein domams by modifications at the DNA level is now an accepted and routine technique in molecular biology This ability has developed over the past 10–l5 years
Advances in molecular biology that have allowed the cloning and transfer of genetic material both wlthm and between organisms have become a key tool in molecular blology Molecular blologlcal techniques have allowed the role of gene function
The ability to create defined mutations and to generate precise fusions of protein domams by modifications at the DNA level is now an accepted and routine technique in molecular biology This ability has developed over the past 10–l5 years
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