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上海一基实业有限公司
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1174-72-7
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文献和实验体病毒和外源质粒等。 简单来说,病毒感染细菌后将自己的基因整合到细菌基因组内用以繁殖,并通常在复制完成后杀死宿主细胞,为了回避这个致命的威胁,细菌进化出了强大的适应性免疫系统—CRISPR/Cas,它由一系列高度保守的短 DNA 重复序列组成,通常为 21~48 bp 的回文序列或短的反向重复序列,这些序列之间被称为间隔子的可变序列片段间隔开,通常介于 26~72 bp 之间,CRISPR 阵列的第三部分是前导序列,其位于第一个重复序列上游,富含 AT,约为 200~500 bp,包括必需的启动
DNA聚合酶、模板DNA、缓冲液。 三、试剂与器材 1、试剂10×EX Taq Buffer (Mg2+ plus) dNTP Mixture (各2.5 mM) TaKaRa EX Taq聚合酶5U/μl 模板DNA (已预先稀释) 上、下游引物混合物(已预先稀释) 2、器材 微量移液器及吸头,硅烷化的PCR小管,PCR扩增仪(PTC-100),台式高速冷冻离心机。 四、操作方法 1.编辑设定PCR扩增程序。 2.PCR管中加入灭菌水、缓冲液、四种dNTP
Mg2+,25mmol/L dNTPs,1U Tag酶,3μl 10×PCR缓冲液,加双蒸水补至30μl。反应参数为:94℃90s;94℃30s,56℃1min,72℃1min,30循环;72℃10min(PCR仪)。反应结束后,用0.8%琼脂糖凝胶(含EB0.5μg/ml)电泳检测扩增产物,取3μl产物释稀50倍,用作选择性扩增模板。(四)选择性PCR扩增取释稀后的产物3μl,加入EcoRⅠ选择性引物、MseⅠ选择性引物各75ng,15mmol/L Mg2+,25mmol/L dNTPs
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