- ¥1000
- ATCC
- 美国
- AT1145
- 2025年07月06日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
1年
- 英文名：
Rosetta-gami (DE3)pLysS
- 库存：
20
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
500ul甘油菌
基本信息
| 出品公司: | ATCC |
|---|---|
| 菌株类型: | E.coli |
| 培养基: | LB培养基 |
| 生长条件: | 37 ℃, 有氧 |
| 基因型: | Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL (DE3) F′[lac+ lacIqpro] gor522::Tn10 trxB pLysSRARE (CamR, KanR, StrR, TetR) |
| 抗性: | 氯霉素，卡那，链霉素，四环素 |
| 质粒转化条件: | 42 ℃热激 |
| 应用: | 蛋白表达 |
| 诱导方法: | IPTG |
订购信息
| 产品编号 | 产品名称 | 规格 | 价格 |
|---|---|---|---|
| AT1145 | Rosetta-gami (DE3)pLysS | 500ul甘油菌 |
¥1000.00 |
菌株特点
Rosetta-gami系列菌株来源于Origami系列宿主菌，该系列菌株的有点除了含有Origami菌株原有的TrxB和Gor基因突变提高含二硫键正确折叠 蛋白的高效表达，同时含有Rosetta系列菌株中含有的真核细胞稀有密码子。该菌株同时集合了Origami(DE3)和Rosetta(DE3)的优点。
Rosetta-gami(DE3)pLysS系列菌株含有pRARE质粒，能够提供AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和GGA六个真核细胞中的稀有密码子tRNA，能够有效提升真核细胞蛋白的表达水平。pRARE质粒具有氯霉素抗性。
Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞同时具有氯霉素，卡那，链霉素和四环素四种抗生素抗性。
Rosetta-gami(DE3)pLysS被建议使用于含有Bla标记的氨苄抗性表达质粒。当使用pCDF系列载体时，还需要使用壮观霉素(Spectinomycin)进行筛选。菌株中 的rpsL突变使得该菌株具有链霉素抗性
DE3是溶源性的 λDE3, 所以带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体，及其他T7启动子系列载体。
含有pLSs质粒，pLySs质粒能够产生T7溶菌酶，可以有效降低目的基因的基础表达水平。pLySs质粒使得该菌株具有氯霉素抗性。pLySs质粒的起始复制位点是p15 Origin, 这使得该质粒能够和pUC-及pBR322-衍生的质粒互相共存。
亮氨酸生长缺陷型菌株。
1、安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。
2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于1-2支建议的培养基试管中，并在建议的条件下培养。
3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在6-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需要连续两次继代培养才能正常生长
4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。
5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。
特别注意事项：
l、微生物菌种应保藏于低温、清洁和干燥的地方,室温放置时问过长会导致菌种衰退;
2、菌种操作应在无菌条件下进行,防止杂菌污染:
3、斜面菌种保藏时间通常为1-2个月,应根据菌种状况及时转接;冻干菌种保藏时间通常为5~10年;
4、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时与我司销售联系或更换新的菌种。
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文献和实验Rosetta-gami B 细胞死亡，生长极困难 毒性蛋白 更严格的本底表达控制 pLysS 菌株 无克隆生长 过高本底表达 更严格的本底表达控制 pLysS、pLysE 菌株 重组质粒和菌株的保存建议 在实验室里保存重组菌株的时候，为了挑菌和传代方便，我们常用LB平板保存在4℃冰箱中，需要提质粒和表达接种的时候，就直接从平板上挑菌，但是这种方法对于重组质粒的稳定性不利
21(DE3)融源菌则是添加T7聚合酶基因,为T7表达系统而设计. 真核细胞偏爱的密码子和原核系统有不同,因此,在用原核系统表达真核基因的时候,真核基因中的一些密码子对于原核细胞来说可能是稀有密码子,从而导致表达效率和表达水平很低.改造基因是比较麻烦的做法,Rosetta 2 系列就是更好的选择―― 这种携带pRARE2质粒的 BL21衍生菌,补充大肠杆菌 缺乏的七种(AUA,AGG,AGA,CUA,CCC,GGA 及CGG)稀有密码子对应的 tRNA,提高外源基因、尤其是真核基因在原核系统
2系列，thioredoxin reductase (trxB)和glutathione reductase (gor)两条主要还原途径双突变菌株，显著提高细胞质中二硫键形成几率，促进蛋白可溶性及活性表达。（卡那霉素敏感）Rosetta-gami™ 2 则是综合上述两类菌株的优点，既补充7种稀有密码子，又能够促进二硫键的形成，帮助表达需要借助二硫键形成正确折叠构象的真核蛋白。（卡那霉素敏感）Origami B 是衍生自 lacZY突变的 BL21菌株，这个突变能根据IPTG的浓度精确调节表达
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