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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
1年
- 英文名:
X33
- 库存:
18
- 供应商:
康朗生物
- 规格:
300ul/株
产品信息:
| 货号 | 名称 | 产品形式 | 规格 | 储存 |
| A0059 | X33 Strain | 甘油菌 | 300μl | -20℃ |
使用说明:
康朗质粒平台的各批次质粒菌株发货前均经过严格的多重验证,如存在质量问题,请在收到产品三个月内通知我司。收到甘油菌后,请及时在固体平板上划线培养,挑取单菌落接种到液体培养基中,震荡培养后使用并保存甘油菌。如需获取其他详细信息请登录我司官网联系QQ客服查询。
基因型:
野生型
基本信息:
培养基:YPDA
菌株类别:酵母菌
培养条件:28℃,有氧,YPDA
质粒转化:电激
保存方式:30%甘油,-20℃
基本应用:用于蛋白表达
备注:
菌株简介:
X-33是毕赤酵母菌株,属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的,因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染,往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素,来抑制细菌菌的污染和生长。毕赤酵母适宜的生长温度是28至30度,温度超过32度对蛋白的表达是有害的,并可能导致细胞的死亡。X-33毕赤酵母可以在YPD培养基中生长。
X-33毕赤酵母被推荐用来表达含有Zeocin抗性的载体载体重组质粒,例如pPICZ A,B,C系列的载体。在筛选X-33重组转化菌株时,Zeocin抗生素的工作浓度是100 ug/ml。X33毕赤酵母含有AOX1基因,产生的转化株是Mut+基因型。
注意事项:
1、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。本产品仅可用于实验室研究,不能用于动物,人体以及作为食品添加剂等用途。
2、使用甘油菌时可不完全融解,在甘油菌表面蘸取少量涂布固体琼脂平板即可,也可完全融解后使用,但随着冻融次数的增加,菌株的活力会逐渐下降。
菌种培养及打管说明:
1、安瓿瓶开封:用浸过75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。
2、菌株恢复培养:用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基,滴入安瓿管内,轻轻振荡,使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液,移植于1-2支建议的培养基试管中,并在建议的条件下培养。
3、注意事项:菌种活化前,请将安瓿管保存在6-10℃的环境下,某些菌种经过冷冻干燥保存后,延迟期较长,需要连续两次继代培养才能正常生长
4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。
5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。
特别注意事项:
l、微生物菌种应保藏于低温、清洁和干燥的地方,室温放置时问过长会导致菌种衰退;
2、菌种操作应在无菌条件下进行,防止杂菌污染:
3、斜面菌种保藏时间通常为1-2个月,应根据菌种状况及时转接;冻干菌种保藏时间通常为5~10年;
4、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时与我司销售联系或更换新的菌种。
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文献和实验一,酵母表达系统毕赤酵母表达系统(invitrogen公司):分泌型质粒pPIC9K,宿主菌毕赤酵母GS115分泌型质粒pPICZalpha (甲醇诱导)宿主菌毕赤酵母x33分泌型质粒pHIL-S1二,原核表达质粒表达宿主菌为BL21(DE3)系列带His标签(N端):PET5-(a)氨苄抗性带His标签(N端):PET28-(a)卡那抗性带His标签(C端):PET24-(b)卡那抗性带His标签(C端):PET21-(a)氨苄抗性带His标签(N端)+TrxA(硫氧还蛋白):PET-32
。 Xiang Yang:EasySelect试剂盒准备了三种菌株:X33,GS115和KM71H。我倾向于选择X33,因为这个菌株转化率和表达量相对而言较高,如果你有电转仪(electroporator),可以尝试一下。如果没有的话,EasySelect也准备了化学转化试剂――EasyComp Transformation,但是由于转化率的缘故,我建议使用电转仪。 leslie:在得到了正确的序列之后就可以准备转化毕赤酵母了,试剂盒携带有的是X-33,GS115和KM71H这三种毕赤酵母(另外常用
了正确的序列之后就可以准备转化毕赤酵母了,试剂盒携带有的是X-33,GS115和KM71H这三种毕赤酵母(另外常用的还有SMD1168),每种酵母的特点有些不尽相同(Manual上写的很清楚),其中X-33由于是野生型,因此耐受性比较好,如果担心转化率的话可以考虑这种酵母菌,而GS115与X33一样都是属于MUT+表现型,也就是说可以在含甲醇的培养基中快速生长,但是据说会对外源基因表达有影响,KM71是MUT-型酵母,在甲醇培养基中生长缓慢,但是也有利于翻译后加工,比如形成二硫键,糖
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