Western封闭液II 蛋白质研究

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销售Western封闭液II 蛋白质研究，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：Western封闭液II 蛋白质研究
规格：100ml
品牌：百奥莱博
编号：RFT087
本产品以奶粉为基础，采用独特配方，可快速高效地封闭膜上多余的结合部位，减少非特异结合情况的产生，降低背景，适用于各种转印膜的封闭，操作方便快捷。另外，本产品特别添加了蛋白稳定剂，可保证每次实验封闭效果稳定可靠。

使用方法：
特别提醒：该产品效期较短，开盖后如有异味或有絮状沉淀，表明已经失效，不能使用。

1、本产品无需稀释，开盖即用。
2、目的蛋白转移完毕后，将印迹膜放入容器中，加入适量Western封闭液II(以完全覆盖印迹膜为宜) 。
3、室温孵育30分钟至2小时，必要时可4℃孵育过夜。
4、封闭结束后弃去封闭液，进行Western Blot后续操作。

注意事项：
1、由于奶粉中含有微量牛IgG，其结构与羊(goat and sheep)IgG极其类似。因此来源于羊的一抗或二抗能与牛IgG交叉反应，产生高背景。因此该封闭液不推荐用于羊来源的一抗或抗羊的二抗。
2、奶粉中含有生物素，该封闭液不能用于Streptavidin/Biotin系统。
3、该封闭剂是最适合ECL/HRP系统的封闭剂。

储存条件：2～8℃，有效期6个月。

更多有关Western封闭液II 蛋白质研究的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销售以下产品：
F030835 BIOTIN标记山羊抗鸡IgY IgG抗体 Polyclonal Goat Anti-Chicken IgY(IgG)*BIOTIN
赖氨酸琼脂糖凝胶4B VE
B1001 驴血清(辐照灭菌)
002007 肝素钠抗凝羊血
DL-丙氨酸甲酯盐酸盐 Amyloglucosidase from aspergillus niger 13515-97-4
肌氨酸氧化酶 Staurosporine from Streptomyces sp. 9029-22-5
ARB10919 人抗髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗体(MOG-Ab)含量分析
ARB10229 人β葡糖苷酶(β-glucosIdAse)Elisa定量检测 Human β-glucosidase ELISA KIT
BL1311 Taq Plus DNA Polymerase
ARB10462 人生长激素释放多肽(GHRP)酶标法分析 Human growth hormone releasing Peptide,ghrp ELISA KIT
ARB13952 猪活化素A(ACV-A)elisa检测操作说明书 Porcine activin a,acv-a ELISA KIT
ARB13980 猪流行性腹泻抗体(PED Ab)Elisa分析
Western封闭液II 蛋白质研究关键词：百奥莱博,RFT087,Western封闭液II

PY02-085 0.5%葡萄糖肉汤琼脂 250克
BTN130987 接头DNA Adaptors
ARB11255 人胃泌素释放肽前体(ProGRP)ELISA检测服务 Human pro-gastrin-releasing Peptide, progrp ELISA KIT
ARB12254 大鼠血管紧张素Ⅱ/生成素(AngⅡ)elisa测定使用说明书 Rat angiopoietin-2,ang-2 elis kit
BL1388 SABC兔IgG-AP kit
拉米呋啶 Ampicillin sodium salt 134678-17-4
16423-68-0 赤藓红B(四碘荧光素)Erythrosin B
BOC-L-亮氨酸 Amberlite 719 13139-15-6
ARB12405 大鼠组织多肽抗原(TPA)含量测试 Rat tissue polyPeptide antigen,tpa ELISA KIT
ARB10862 人抗结核杆菌(TB-Ab)代做ELISA实验 Human anti-tubercle bacilli ,tb-ab ELISA KIT
ARB14226 禽流感H5亚型抗体(AIV-H5-Ab)elisa检测说明书
F030806 BIOTIN标记山羊抗小鼠IgG2a抗体 Goat Anti-Mouse IgG2a*BIOTIN
HC0339 雷勃大容量电动移液器
ARB13275 小鼠雌二醇(E2)elisa测定使用说明书 Mouse estradiol,e2 ELISA KIT
焦碳酸二乙酯 BRA 1609-47-8
HC0081 PCR管(鼓盖)
间甲氧基苯乙*(代"酸") Carboxymethyl cellulose CM-23 1798-09-0
磷酸铵 DAB 25447-33-0
硝酸益康唑 CTAB 24169-02-6
谷氨酰胺转移酶 Potassium acetate 80146-85-6
L-来苏糖 CHAPS 1949-78-6
Western封闭液II 蛋白质研究关键词：百奥莱博,RFT087,Western封闭液II


·土壤基因组DNA提取试剂盒
编号：RFT036
英文名称：Soil genomic DNA Extraction Kit
规格：50次
本公司的土壤DNA提取试剂盒采用独特的腐殖酸去除液(缓冲液R2)能够有效去除腐殖酸；吸附柱CG能能有效去除金属等抑制因子，提纯得到的基因组DNA可直接用于PCR 反应，酶切或定量实验。

试剂盒组份：

试剂盒组成	50次	贮存方式
缓冲液R1	40 ml	常温
缓冲液R2	6 ml	常温
缓冲液R3	6 ml	常温
缓冲液R4	10 ml	常温
缓冲液 R5	20 ml	常温
漂洗缓冲液WB1	30 ml	常温
漂洗缓冲液WB2 (浓缩液)	13 ml	室温
洗脱缓冲液EB	15 ml	室温
Glass beads	20 g	常温
吸附柱CG	50个	室温
收集管(2 ml)	50个	室温
说明书	1份

准备工作：
1. 准备55℃，70℃水浴；无水乙醇；异丙醇；制冰机；1.5ml离心管；2ml离心管
2. 按照标签所示在漂洗缓冲液WB2中加入无水乙醇，混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3. 每次使用前请检查缓冲液R2，缓冲液R3是否有沉淀生成，如果出现沉淀，37℃温浴至沉淀溶解后再使用。

标准操作步骤：
如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、称0.3-0.5 g土壤置于2ml离心管中，加入0.4 g Glass Beads，再加入780μl 缓冲液R1与100μl 缓冲液R2。涡旋器高速震荡3-5min。
注：对含水量丰富的样品，可以预先离心除去部分水分后再称取样品。缓冲液R2是腐殖酸去除剂，100μl对大部分样品来说足以有效除去腐殖酸等抑制因子。对一些腐殖酸含量特别丰富的土壤， 缓冲液R2的量可以适当增加，但不能超过250μl，否则会严重影响DNA的得率。
2、加入200μl 缓冲液R3(R3如有沉淀37℃水浴完全溶解后再用)，涡旋混匀。 70℃水浴处理10min。期间振荡几次。
注：如果要纯化革兰氏阳性菌的DNA，请在70℃处理完后，再90℃水浴处理2min。
3、12000 rpm(~13000g)离心1分钟，取600μl上清到1.5ml离心管中，加入180μl 缓冲液R4混匀。
注：转移上清时确保不要吸取到沉淀，转移的上清量最好不超过80%。
4、冰上放置5分钟。12000 rpm(~13000g)离心1分钟。 转移上清到新的1.5ml离心管中。
注：转移上清时确保不要吸取到沉淀，转移的上清量最好不超过80%。
5、加入0.7倍上清体积的异丙醇颠倒混匀。12000 rpm(~13000g)离心2分钟。小心地倒掉上清。
注：如果样品中DNA含量很低，加入异丙醇混匀后-20℃放置1小时。
6、加入350μl 缓冲液R5，待沉淀完全溶解后加入300μl无水乙醇，混匀。
注：为加速溶解沉淀，可置样品于55℃水浴中。
7、将上步混合液转移到吸附柱CG中(吸附柱放入收集管中)，12000rpm离心30秒，倒掉滤过液。
8、向吸附柱CG中加入500μl 漂洗缓冲液WB1，12,000 rpm (~13,000×g ) 离心30 秒，倒掉废液。
9、向吸附柱CG中加入600μl 漂洗缓冲液WB2(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12,000 rpm (~13000g) 离心30 秒，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。
10、向吸附柱CG中加入600μl漂洗缓冲液WB2，12,000 rpm (~13000g) 离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CG放入收集管中。
11、12,000 rpm(~13000g)离心2分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注：此步骤非常重要，其目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
12、将吸附柱CG转入一个干净的1.5ml离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50–100μl经70℃水浴预热的洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，12,000 rpm(~13000g)离心2分钟。
注意：
a.洗脱缓冲液体积最好不少于50μl，体积过小影响回收效率。
b.洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
13、DNA产物-20℃保存。

大量操作步骤(针对含微量核酸的样品)
1、称1-5g土壤置于10ml离心管中，加入1g Glass Beads，再加入3ml 缓冲液R1与200μl 缓冲液R2。涡旋器高速震荡3-5分钟。
2、加入600μl 缓冲液R3，涡旋混匀。70℃水浴处理10分钟。期间振荡几次。
3、3000g离心3分钟，转移上清到新的离心管中，加入550μl 缓冲液R4混匀。
4、冰上放置5分钟。8000g离心10分钟。转移上清到新的离心管中。
5、以下按标准操作步骤的第五步继续操作。

DNA浓度及纯度检测：
基因组DNA*(代"片")段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA*(代"片")段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0％琼脂糖凝胶，使用λ/HindIII判断基因组的大小，完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时， OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水洗脱，比值可能偏低，但并不表明DNA纯度不高。

常见问题分析：

常见问题	可能原因	建议
没有洗脱出DNA	加入缓冲液R5后没有加入无水乙醇	样品过柱前，必须用无水乙醇调整核酸结合条件，否则核酸不能挂柱。
	漂洗缓冲液WB2中没有加入乙醇	漂洗缓冲液WB2使用前请按照标签加入无水乙醇。无水乙醇加入量不正确会导致核酸提取量大大降低。
低浓度的DNA量	缓冲液R2使用过量	按照步骤1加入适量缓冲液R2
	洗脱体积太小	洗脱体积不能低于50μl，如洗脱体积太小，回收率将大大降低。
	洗涤不恰当	漂洗缓冲液WB2使用前请按照标签加入无水乙醇。无水乙醇加入量不正确会导致核酸提取量大大降低。
低A260/A280比率	蛋白污染	不要忽略步骤8中用漂洗缓冲液WB1冲洗吸附柱
	洗脱液pH值不合适	确保使用的洗脱液pH在8.0以上，如低于8.0将导致DNA洗脱量过低。
下游应用不好	提取的DNA含盐量高	漂洗缓冲液WB2使用前请按照标签加入无水乙醇。
	提取的DNA含有乙醇	步骤11空甩柱子2分钟非常关键，彻底去除漂洗液中的乙醇。
	抑制PCR反应	增加缓冲液R2用量，彻底去除腐殖酸等PCR抑制因子；步骤4中确保不要吸取到沉淀。

储存条件：室温，有效期12个月。

北京百莱博科技有限公司是蛋白质研究产品的专业生产供应销售商，恭候您的咨询选购Western封闭液II 蛋白质研究。