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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 免疫原:
Synthetic MAP peptide derived from human beta-Actin
- 亚型:
IgG
- 克隆性:
多克隆
- 宿主:
Rabbit
- 应用范围:
WB, IHC-P, IF/ICC, P-ELISA
- 浓度:
1mg/1ml
- 抗体英文名:
Collagen IV
- 规格:
50ul 100ul 200ul
我公司开发的抗体已被国内外广大科研工作者使用,被称谓:质量信得过产品.
规格价格:100ul 200ul 大包装/询价
说 明 书:咨询客服
研究领域:肿瘤 细胞生物 免疫学 细菌及病毒 细胞表面分子
抗体来源:Rabbit
克隆类型:Polyclonal
交叉反应:Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse, Rabbit,
产品应用:WB=1:500-2000 ELISA=1:500-1000 IHC-P=1:400-800 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500 (石蜡切片需做抗原修复)
not yet tested in other applications.
optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
抗体的使用和保存方法
抗体,无论是保存还是运输,都要避免反复冻融。反复冻融,冰晶会破坏抗体的空间结构,导致蛋白变性形成多聚体,从而降低抗体的结合能力,也加快了抗体球蛋白的降解速度。抗体保存得当与否,直接决定了抗体的活性和使用效果,如果抗体保存得当,Bioss的抗体活性大部分都可以维持数年。下面就给大家讲解下,Bioss抗体的使用和保存方法:
一、收到抗体后的操作
收到Bioss抗体后(大部分抗体是溶液态),请务必在 4℃,12000rpm,离心3分钟,再打开管盖进行分装、溶解和保存(如果抗体体积小于50ul,请延长离心时间至5 分钟,以保证全部抗体均离心下来,干粉状态的同样适用)。Bioss抗体使用特制的储存管,只有在12000rpm 离心3分钟,才能将附着在管壁或盖内的抗体全部离心下来(即使是在10000rpm离心也会离心不完全,导致出现抗体的量不足的现象)。请按照说明书推荐的保存条件正确保存和使用抗体。
二、抗体的长期保存
对于Bioss大部分抗体,比较合适的保存方式是:分装后保存在-20℃或者-80℃。
(1)对绝大多数Bioss抗体来说,保存在-20℃就完全足够了。
(2)分装可以最大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害,同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。
(3)分装的量以一次实验用完为好,最少不能少于10ul每份。因为分装体积越小,抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响。
(4)复融后的分装抗体如果一次用不完,将剩余母液保存在4℃,避免再冻起来。
(5)抗体工作液应该当天配制当天用完,4℃保存尽量不要超过1天。
三、抗体的短期保存
大部分Bioss抗体,在4℃短暂保存1~2 周对抗体活性没有影响。如果抗体很快会使用(1~2 周内),推荐在4℃保存,这是为了避免反复冻融对抗体活性的损害,如果要长期保存,则最好是在-20℃或者-80℃。最关键的一点是要根据说明书推荐的方式来正确的保存抗体。腹水形式的抗体产品请在收到后立即冻起来,因为该类产品含有大量的蛋白酶,长期在4℃保存会导致抗体的降解。
四、抗体的运输条件
一般国内的的运输过程需要2-5天的时间,是在低温4℃的条件下来完成的。 4℃运输最主要的目的是为了避免反复冻融对抗体活性的损害(如果使用干冰运输,那么收到时抗体是冻起来的,为了分装就需要解冻,这就多了一次冻融的过程),所以抗体运输过程中绝对避免干冰运输。
五、抗体的稳定性
(1) 抗体的稳定性是自然界长期进化的结果,抗体是免疫系统中最重要的分子之一,其稳定性是自然进化筛选的结果,在众多物种中,抗体分子形成了保守而稳定的结构。
(2)抗体分子的高Tm值,在室温下,甚至短时间温度达到50~60℃,抗体分子都能维持正确折叠,保持其应有的活性。
(3)抗体的纯度。Bioss采用先进的抗体纯化技术,确保抗体产品的高纯度,保障其抗体产品的稳定性。
(4)抗体的浓度。高浓度的抗体产品可减少容器表面吸附造成的物质损失,高浓度的抗体稳定性更好。Bioss大部分抗体浓度为1mg/ml,抗体纯度高,特异性好,效价更高。
六、关于加入甘油保存
有些人会加50%的甘油到抗体中来避免反复冻融,甘油在-20℃会降低冰点,这对很多抗体可能是可行的。加入甘油的溶液不建议在-80℃保存,因为这已经超过了甘油的冰点。如果您要加入甘油来保存抗体的话,请谨慎注意无菌操作,避免污染。
七、关于蛋白保护剂
蛋白在高浓度时更不容易降解(1mg/ml 或者更高),这就是为什么在抗体中加入BSA 之类作为稳定剂的原因了;另一方面,加入的蛋白也可以减少抗体由于管壁吸附所造成的损失。但是如果抗体要用来标记的话,则不能加入蛋白稳定剂,因为这些稳定剂会和抗体一起竞争结合标记物。
八、关于Proclin300的使用
为了防止微生物污染,Proclin300经常被加入到抗体中(终浓度0.03% (w/v))。Bioss的绝大部分抗体已经含有了0.03%的Proclin300,在说明书的储存缓冲液中有标明。
九、特殊抗体的保存条件
偶联抗体:所有偶联抗体都需要在棕色管中或使用锡箔纸避光 保存,尤其是荧光抗体,对光极为敏感,因此在所有的实验阶段也是要避光操作的。
WB对照系统
阳性对照:最好有标准品,或阳性血清、阳性上清。
阴性对照:测血时用相应小鼠未免疫血清,测培养上清,用无克隆培养上清。
空白对照:不加一抗,用1%BSA代替。
无关对照(替代对照):用无关项目一抗,或无关项目的抗体。
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文献和实验(3)同上。两个磷酸化位点都要做,但是可能在不同的病理条件下,侧重点有所不同,这主要体现在你的论文的讨论中。因此建议实验前多做论文研究,查阅一下别人的发表文章,看看与你的病理模型更相关的是哪个位点。 真爱满行囊 非常感谢你 的回复,现在我遇到的问题是我做出来蛋白总量还有216位点是有变化的,9位因为买的是santa curz的抗体,现在死活做不出来,很头痛,我要说明的问题是他的活性降低,我也看到216位点磷酸化水平降低了,可是现在没有第九位的结果(就是没有办法得到第九
的,但是这结果是不是假阳性呢?还得做个阴性对照。阴性对照如何设置呢?考虑到整个实验体系会出现 beads、抗X抗体、诱饵蛋白 X、靶蛋白 Y(co-IP): 可能出现的假阳性来源 需要的阴性对照 抗 X 抗体结合非特异的蛋白 与 IP 一抗种属亚型相同的免疫球蛋白(比如,抗 X 抗体是 Mouse IgG,阴性对照可使用 Mouse 免疫球蛋白) beads 对蛋白的非特异结合* 同上,此外还可进行 Pre clear,IP 正式实验前排除非特异结合蛋白。如果使用琼脂
的作用是调控基因表达。例如组蛋白甲基化多导致基因沉默,去甲基化则相反;乙酰化一般是转录激活,去乙酰化则相反。当然,也可在此基础上产生复杂的生物学效应。例如组蛋白去乙酰化酶 HDAC 可影响免疫系统;H3K4me3、H3K9me2 能够调控记忆的形成, 而且 H3K 甲基化与 X 染色体失活、基因组印记和异染色质形成有关;H3 乙酰化通过多种机制调控以来 ATP 的染色质重塑 ,并参与炎症反应;H2A、H2B 泛素化则与 DNA 损害反应有关;而 H3S28 磷酸化与 H3K27 乙酰化可激活转录
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