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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
长期
- 英文名:
SABC(Mouse IgG)- FITC(POD) Kit
- 库存:
476
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销售SABC免疫组化试剂盒(小鼠IgG)(FITC荧光/DAB显色) 蛋白质研究,我公司是生物试剂、化学试剂专业供应商,立足北京,服务全国的高校、研究所、医院、企业科研部门,欢迎各位老师来电垂询订购。
名称:SABC免疫组化试剂盒(小鼠IgG)(FITC荧光/DAB显色) 蛋白质研究
规格:100T-200T
编号:QN1220
品牌:百奥莱博
英文名:SABC(Mouse IgG)- FITC(POD) Kit
本试剂盒适合于一抗为小鼠IgG来源的免疫组化实验.提供DAB及FITC两种显色选项。
SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有极高的亲和力,亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,对组织和细胞的非特异吸附很低,基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex,SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶或者FITC和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶与FITC将保证SABC具有很高的敏感性。
试剂盒组份:
封闭液(5% BSA)—————————————10ml
Bio-羊抗小鼠IgG浓缩液-—————————100ul
SABC-FITC浓缩液-————————————100ul
SABC-POD浓缩液—————————————100ul
稀释液—————————————————30ml
20×DAB显色液A—————————————1ml
20×DAB显色液B—————————————1ml
抗荧光衰减封片剂————————————10ml
操作步骤:(以石蜡切片热修复为例)
1、切片常规脱蜡至水。3%H2O2室温5-10分钟以灭活内源性酶(如果FITC,可省掉此步)。蒸馏水洗3次。
2、热修复抗原:将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10分钟后,反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2次。
3、滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 免洗。
4、用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗,37℃ 1小时孵育左右或20℃ 2小时左右,也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间)。
5、根据使用量,用稀释液将bio-羊抗小鼠IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul bio-羊抗小鼠IgG浓缩液,混匀即成工作液,此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素化羊抗小鼠IgG工作液,20-37℃ 处理30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟。如果用荧光观察,请接步骤6、7,如果用DAB显色,请直接转至步骤8。
6、根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-FITC浓缩液,混匀即成SABC-FITC工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-FITC工作液,20-37℃,30分钟(避光)。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次,每次5分钟。
7、滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。
8、根据使用量,用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-POD浓缩液,混匀即成SABC-POD工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-POD工作液,20-37℃,30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次,每次5分钟。
9、DAB显色:根据用量,用PBS(pH7.2-7.4)配制,按1ml PBS加入50ul 20×DAB显色液A,加入50ul 20×DAB显色液B,混匀后加至切片。室温显色, 镜下控制反应时间,一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
10、苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。
对于细胞爬片:常规固定后,PBS漂洗两次,再用0.5%Txiton X-100室温20分钟,PBS漂洗两次,3%H2O2(如果用FITC,刚可省掉此步)处理15分钟;PBS漂洗两次,下接上面第4步。
对于冰冻切片:固定后,可用PBS漂洗两次,再接上面第二步。
注意事项:
1、如果用DAB染色背景过高,在SABC反应之后,DAB显色之前,用加有0.01-0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次,PBS洗2次,然后DAB显色。
2、如果用FITC观察背景过高,在SABC反应之后,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次,PBS洗涤2次,然后封片观察。
3、因为免疫组化指标众多,标本不一,此步骤仅作参考。
储存条件:-20℃
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SABC免疫组化试剂盒(小鼠IgG)(FITC荧光/DAB显色) 蛋白质研究关键词:SABC免疫组化试剂盒(小鼠IgG)(FITC荧光/DAB显色),QN1220,SABC(Mouse IgG)- FITC(POD) Kit
·CCCP细胞凋亡诱导剂(50mM)
编号:QN1291
英文名称:Carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone
规格:100ul
CCCP是一种质子载体(H+ ionophore),强效的线粒体氧化磷酸化解偶联剂,促使线粒体内膜对H+产生通透性,导致线粒体内膜两侧的膜电位丧失,诱导凋亡发生。也可作用于叶绿体膜,抑制光合作用;CCCP还可抑制内质网-高尔基体(ER-Golgi)之间的蛋白转运,高亲和力结合细胞色素C氧化酶。
CAS号:555-60-2
分子式:C9H5ClN4
分子量:204.62
储存条件:-20℃保存
纯度:≥97% (TLC)
CCCP还具有其他功能:
1)在牛蛙交感神经方面的实验表明,CCCP 可增强促黄体生成素释放激素的释放;
2)作为一种质子导体在葡萄糖存在的情况下影响E.coli 细胞活性;
3)对细胞内钙水平的各种调节效应;
4)抑制脂肝酶的分泌;
5)部分抑制pH梯度活化的Cl-摄取以及刷状缘膜的Cl-/Cl-交换等。
本品是溶于DMSO的CCCP溶液,浓度为50mM,体积为100μl(相当于1mg的总量),常用作一种阳性对照来诱导细胞凋亡,并配合线粒体膜电位检测探针JC-10(货号:J8050)来进行相关研究。
使用方法:
1)收到本品(CCCP,50 mM)后按照10-50µl的小量分装,冻存在-20℃,避免反复冻融。
2)推荐工作浓度为10-100µM,初次实验可按照1000×稀释起始浓度(如1µl起始母液加入1ml细胞培养液)进行凋亡诱导20min,随后进行JC-1或者JC-10线粒体膜电位丧失检测,呈绿色荧光。
·L-谷氨酰胺
编号:QN0366
英文名称:L-Glutamine
规格:25g|100g
本品用于生化研究,配置培养基添加剂。
别名:L-谷氨酸酰胺;L-Gln
CAS号:56-85-9
分子式:C5H10N2O3
分子量:146.15
储存条件:室温干燥保存
纯度:>98.5
性状:无色针状结晶。
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文献和实验免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)是一种以抗原抗体特异性反应为基础,对组织或细胞中特定抗原(通常是蛋白质)的定性和定位分析的实验方法。免疫组化可以在微观层面上反映出疾病过程中细胞内蛋白质的表达变化,对于病理诊断和研究具有重要价值。通常,根据显色剂(酶、荧光素、同位素、 金属离子等)与样品类型的不同,将免疫组化作以下分类。 图 1 免疫组化病理分类 IHC/ICC(统称为免疫组化)是指通过酶标记物在组织、细胞原位通过抗原抗体反应和化学的显色反应,对特定抗原进行定性和定
静置,或 37℃ 1 小时;12)II抗中可加入 0.05% 的 tween-20。13)PBS 洗 3 次各 5 分钟;14)DAB 显色 5~10 分钟,在显微镜下掌握染色程度;15)PBS或自来水冲洗 10 分钟;16)苏木精复染 2 分钟,盐酸酒精分化;17)自来水冲洗 10~15 分钟;18)脱水、透明、封片、镜检。 二、SABC法 1)脱蜡、水化。2)PBS 洗两次各 5 分钟。3)用蒸馏水或PBS配置新鲜的3%H2O2,室温封闭5~10分钟,蒸馏水洗3次。4)抗原修复。5)PBS洗5分钟
冰冻切片免疫组织化学染色 1.新鲜组织或在-80℃保存的组织用恒冷箱冰冻切片机切片,厚度为10~40gm; 2.将切片裱于载玻片上,立即用电吹风吹干或室温放置30分钟,如不能及时染色,密封后一20℃保存; 3.染色前组织切片用冷丙酮4℃固定10―20分钟,PBS洗2次,每次5分钟; 4。必要时应用0.1%枸橼酸钠与0.1%Triton X―100的混合液将细胞膜打孔。 其余步骤同石蜡切片。SABC法染色,DAB显色大鼠小肠腺细胞核呈棕色为BrdU免疫
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