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- 北京
- QN1219-ARE
- 2025年07月10日
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冷藏
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长期
- 英文名：
SABC(Rabbit IgG)-FITC(POD) Kit
- 库存：
329
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销售SABC免疫组化试剂盒(兔IgG)(FITC荧光/DAB显色)促销，我公司是生物试剂、化学试剂专业供应商，立足北京，服务全国的高校、研究所、医院、企业科研部门，欢迎各位老师来电垂询订购。
名称：SABC免疫组化试剂盒(兔IgG)(FITC荧光/DAB显色)促销
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
规格：100T-200T
英文名：SABC(Rabbit IgG)-FITC(POD) Kit
本试剂盒适合于一抗为兔IgG来源的免疫组化实验，提供DAB及FITC两种显色方式。
SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10)，经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex，SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶或者FITC和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶与FITC将保证SABC具有很高的敏感性。
试剂盒组分：
封闭液（5% BSA）———————————10ml
生物素标记羊抗兔IgG浓缩液-——————100ul
SABC-FITC浓缩液-———————————100ul
SABC-POD浓缩液————————————100ul
稀释液————————————————30ml
20×DAB显色液A————————————1ml
20×DAB显色液B————————————1ml
抗荧光衰减封片剂———————————10ml
操作步骤:(以石蜡切片热修复为例)
1、切片常规脱蜡至水。3%H2O2室温5-10分钟以灭活内源性酶(如果FITC，可省掉此步)。蒸馏水洗3次。
2、热修复抗原：将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液(PH6.0)，电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2次。
3、滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 免洗。
4、用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周)，也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗，37℃ 1小时孵育左右或20℃ 2小时左右，也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2分钟(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间)。
5、根据使用量，用稀释液将bio-羊抗兔IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul bio-羊抗兔IgG浓缩液,混匀即成工作液，此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素化羊抗兔IgG工作液，20-37℃ 处理30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2分钟。如果用荧光观察，请接步骤6、7，如果用DAB显色，请直接转至步骤8。
6、根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-FITC浓缩液，混匀即成SABC-FITC工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-FITC工作液,20-37℃，30分钟(避光)。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次，每次5分钟。
7、滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。
8、根据使用量,用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-POD浓缩液，混匀即成SABC-POD工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-POD工作液,20-37℃，30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次，每次5分钟。
9、DAB显色:根据用量，用PBS(pH7.2-7.4)配制，按1ml PBS加入50ul 20×DAB显色液A，加入50ul 20×DAB显色液B ，混匀后加至切片。室温显色, 镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
10、苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。
对于细胞爬片：常规固定后，PBS漂洗两次，再用0.5%Txiton X-100室温20分钟，PBS漂洗两次，3%H2O2(如果用FITC，刚可省掉此步)处理15分钟;PBS漂洗两次，下接上面第4步。
对于冰冻切片：固定后，可用PBS漂洗两次，再接上面第二步。
注意事项：
1、如果用DAB染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前,用加有0.01-0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。
2、如果用FITC观察背景过高，在SABC反应之后，用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次，PBS洗涤2次，然后封片观察。
3、因为免疫组化指标众多，标本不一，此步骤仅作参考。
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文献和实验两者所用的显色系统也不同。SP法与SAP法的其他染色步骤同SABC法。 Envision TM SVStemS 该法是近几年在国内推广使用的一种方法，它的原理是将多个抗鼠和抗兔IgG分子与辣根过氧化物酶结合形成聚合物。以代替传统方法的二抗和三抗，直接与特异性第一抗体结合，从而放大了抗原抗体结合的信号，使检测变得简单而且敏感性增加。经DAB显色即可完成染色，其他染色步骤与SABC法相同。 Envision TM SVStemS原理示意图
步，才能找到解决办法。8、SABC染色（37℃）：这是博士德的人性化之处，直接就可以用。9、DAB显色镜下控时：DAB浓度应该比推荐的要低一些，这样可以便于控制反应时间以及在合适的时候中止反应。同时注意，使用后残余的DAB应妥善处理，而不是随便倒入下水道，因为它可能有致癌性。10、苏木素轻度复染：不建议使用。尽管复染后标本层次分明，但实际情况是，这样有时也会掩盖阳性结果，从而使前功尽弃。11、脱水透明：脱水乙醇的浓度由低到高，有一个较准确判断脱水成功与否的办法是：观察透明后盛二甲苯容器的壁，若发现白色雾状
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