北京现货荧光素酶报告基因质粒阴性对照(国产,进口)

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京现货荧光素酶报告基因质粒阴性对照(国产,进口)是高品质的报告基因检测产品，由北京百奥莱博供应，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多荧光素酶报告基因质粒阴性对照等报告基因检测产品请联系我司咨询订购。

名称：北京现货荧光素酶报告基因质粒阴性对照(国产,进口)
品牌：百奥莱博
编号：SY0113
产地：国产|进口
英文名：Luciferase Reporter Plasmid negative control
Luciferase Reporter Plasmid negative control是萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase）报告基因的阴性对照质粒，通过对质粒上可以被预测出的转录因子结合位点全部进行适当的突变处理，使质粒对转录因子的非特异结合降到了最低。Luciferase Reporter Plasmid negative control阴性对照质粒是在 Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site 和 pTA 之间插入了一段不含转录因子结合位点的杂乱序列，因此不会表达 Luciferase。

质粒图谱



储存条件：-20℃。

更多有关北京现货荧光素酶报告基因质粒阴性对照(国产,进口)的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销售以下产品：

·Nanog-GFP报告基因质粒
编号：SY0165
英文名称：Nanog GFP Reporter Plasmid
规格：1μg
Nanog GFP Reporter Plasmid是用于检测NANOG转录活性水平为目的的报告基因。NANOG是近年来在胚胎干细胞（ES细胞）内发现的一个重要转录因子，该因子对维持ES细胞的自我更新及全能性起着关键作用。

NANOG-GFP报告基因主要用于检测细胞Stem Cells信号通路中NANOG的转录活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMNANOG-GFP是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个NANOG结合位点，可以高效地检测NANOG的激活水平。由于载体采用了GFP作为报告基因，更便于后续的检测。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。另外，由于质粒体积减小，使得NANOG-GFP报告基因更易于转染。

质粒图谱



pGM NANOG -GFP质粒测序引物
5’-TAGCAAAATAGGCTGTCCC-3’

使用说明
pGMNANOG-GFP可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。

注意事项
1）本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
2）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

储存条件：-20℃。


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·RIPA裂解液(弱)
编号：SY0315
英文名称：RIPA lysis buffer (Weak)
规格：100ml
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)，其本意是Radio Immunoprecipitation Assay，是一种传统的细胞组织快速裂解液，对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有裂解作用。根据其裂解液的强度不同，大致可以分为强、中、弱三类。

本品为较为温和的裂解液（即RIPA裂解液（弱）），含有sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。

注意事项

1）需自备PMSF。
2）裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3） 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度（SY0298）。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期12个月。

使用说明：

(一) 细胞样品

1）融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2）贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
3）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。

（二）组织样品：

1）把组织剪切成细小的碎片。
2）融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
3）按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4）用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5）充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6）如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。
【注】：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。


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