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- 2025年07月11日
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100
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上海一基实业有限公司
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26832-08-6
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文献和实验Small scale His-Tag fusion protein purification under denaturative conditions
buffer: 6 to8M Urea , 20mM Tris pH 7.5, 100mM NaCl, and appropriate imidazole concentrations. Limitations Do not exposed Ni matrices to reducing agents as DTT or DTE ( you can use ßME up to 20mM); chelating agents as EDTA and EGTA; NH
，1ml NI-NTA/柱)，待完全沉淀(约1h)，先用10ml灭菌水洗，流速：重力作用 2.6 10ml 1*Bind Buffer 进行平衡，流速：重力作用 2.7 将准备好的样品上样，pET.wap.ns; PET21 only分别上柱(结合时间1h-1.5h流速控制在0.1ml/min左右， EP 管，分管收集上样后液体) 2.8 10ml 1* Bind Buffer 洗柱子(收集洗脱液10管，流速在0.3-0.4ml/min左右)
生成羧基氨基咪唑核苷酸(carboxyamino imidazole ribotide,CAIR)。 (8)获得N1原子：由天门冬氨酸与AIR缩合反应，生成5－氨基咪唑－4－(N－琥珀酰胺)核苷酸(4－aminoimidazole－4－(N－succinylocarboxamide)ribotide,SACAIR)。此反应与(3)步相似，由ATP水解供能。 (9)去除延胡索酸：SACAIR在SACAIR甲酰转移酶催化下脱去延胡索酸生成5－氨基咪唑－4－甲酰胺核苷酸(5－
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