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文献和实验。加入甘氨酸可以消除甲醛使交联反应终止。1.1.准备两个长满细胞的150cm2的细胞培养皿(1*107-5*107 个细胞/皿)。将甲醛直接滴入PBS洗过的细胞培养皿中,使其终浓度为0.75%,然后在室温缓慢旋转10分钟,使蛋白和DNA发生交联。1.2 加入甘氨酸使其终浓度为125mM,在室温晃动孵育5分钟。1.3 使用10ml预冷PBS清洗细胞2次1.4 使用细胞刮将细胞收获放入 5ml 预冷PBS中,并转入50ml的管子。1.5.在皿里加入3mlPBS,将剩余的细胞转移到50ml管子里1000g
而导致记号模糊。可以把铝箔放入纱布袋并储存在液氮中。2、在抽提RNA前,先把研钵预冷,往研钵内反复加入液氮,至少4-5次,使研钵充分预冷。从液氮罐中取出样本后,把组织块放入已预冷的研钵中进行研磨,边研磨边加液氮(图1),整个过程都不要使液氮挥干。一次研磨的组织块重量不要超过300mg。图1 用研钵在液氮中把样品研成粉末3、研磨到组织样品成粉末状后(一般需要8-10min的研磨过程),在液氮基本挥发完时,在每个研钵中加2-3ml Trizol试剂。由于此时研钵很冷,Trizol加入后会冻结成固体状(图
的烧杯或烧瓶中,以500~800ml H2O加温溶解明胶,待其完全溶解后,再加入铬矾。注意温度过高易使明胶烧糊,包被玻片时最好控制水温在70℃。如有明显残渣,过滤后使用。 2、甲醛-明胶液 试剂:40%甲醛 2.5ml 明胶 0.5g 蒸馏水 至100ml 配制方法:用少许蒸馏水(约80ml)加热溶解明胶,待完全溶化后,加入甲醛,最后补充蒸馏水至100ml混匀即可。 3、多聚赖氨酸(Poly
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