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- 2025年07月11日
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文献和实验： （1）引物的长度一般为15-30 bp，常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于 Taq DNA 聚合酶进行反应。 （2）引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错配。引物3’端出现3 个以上的连续碱基，如GGG 或CCC，也会使错误引发机率增加。 （3）引物3’端的末位碱基对Taq 酶的DNA 合成效率有较大的影响。不同的末位碱基在错配位置导致不同的扩增
利用 Millicell 培养小室培养皮肤及肺类器官的实验方案
DMEM/F12) 混合均匀。避免在胶原蛋白中产生气泡。 c.加入400µl PHFs (4 × 106细胞/mL细胞悬液)或NIH 3T3细胞。完全混合，但避免产生胶原蛋白泡沫。本步骤在冰上进行。 d.将400µL的胶原蛋白/PHF混合物直接等分加入到每个MilliCell插入式细胞培养小室(MCHT12H48)的中心。 在加入时避免产生泡沫。将细胞培养小室/皿在37°C孵育至少30分钟便于完全聚合。在凝胶化后，胶原蛋白/PHF层在37°C的条件下不添加任何培养基，可保持使用长达5小时
，每天换液一次。 8、用心肌分化培养基（II）进行换液，放置在 37℃，5%CO2 的培养箱中培养 7 天，每天换液一次。 9、用心肌分化培养基（III）进行换液，放置在 37℃，5%CO2 的培养箱中培养 2 天，每天换液一次。 10、分化后，吸出原培养基，加入含 2% I 型胶原蛋白酶和 20% FBS 的 PBS 溶液（含 Ca2+ 和 Mg2+），消化 60min 后，加入 0.25% Trypsin-EDTA 再消化 10min。 11、加入 MEM 完全培养基（10%FBS
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