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文献和实验一、原理氯化三苯基四氮唑(TTC)是标准氧化还原电位为80mV的氧化还原物质,溶于水中成为无色溶液,但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲 (TTF),如下式: 生成的TTF比较稳定,不会被空气中的氧自动氧化,所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体,植物根所引起的TTC还原,可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强,而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC还原量能表示脱氢酶活性,并作为根系活力的指标。二、仪器与用具分光光度计;分析天平(感量0.1mg);恒温箱1台;研钵1套;100ml三角瓶;漏斗
(苯基甲基硅酮)。OV-210、SE-30(甲基硅酮)、Chromosorb G(白色硅藻土载体)等。柱加热炉在温度控制上是非常重要的。4. 纪录仪5. 数据处理装置 一般均附有数据处理计算机。(三)试验条件的选择1. 色谱柱的选择 要注意极性及最高使用温度,柱温不能超过最高使用温度。固定相按极性相似的原则选择。色谱柱的内径大小、长度都能影响分离率。一般而言,内径越小,长度越长,分离效果越好,一般柱长为1m~5m(毛细管柱则20m~100m)。填充剂颗粒一般采用40目~60目,60目~80目及80目
min。 ④以1200g离心10min。 ⑤将上清液转移到另一Eppendorf离心管中,加入等体积的酚/氯仿,并充分混匀,在4℃下放置1h。 ⑥10000g离心30s。 ⑦将液相转移到一新的Eppendorf离心管中,加入终浓度为2mol/L的醋酸氨,两倍体积的无水乙醇,-20℃下静置过夜。 ⑧12000g离心10min。 ⑨真空干燥后,加入50μL无菌水溶解DNA。 ⑩加入Rnase A(终浓度为1mg/mL),37℃下消化1h。 (11)取20μL样品与上样
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