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文献和实验Q1.引物是如何合成的? 目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种,无论采用什么机器合成,合成的原理都相同,主要差别在于合成产率的高低,试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。 (1) 去保护:加入Deblocking脱去碱基上5'- OH的保护基团DMT,获得游离的5'- OH; (2) 耦合:同时加入活化剂和新的碱基,新的碱基5'-OH仍然被DMT保护,3'端被活化与溶液中游离的5'-OH发生耦合反应; (3) 封闭:耦合反应中
与羟基和巯基缩水而成。硫酯键是高能键。 磷酸酯键(phosphoester bond) 由磷酸与羟基缩水而成。磷酸与两个羟基结合时,称为磷酸二酯键。这两种键中的磷酸羟基可解离成阴离子。 生物小分子大多是双官能团或多官能团分子,如糖是多羟基醛(酮),氨基酸是含有氨基的羧酸。官能团在碳链中的位置和在碳原子四周的空间排布的不同,进一步丰富了生物分子的异构现象。 三、杂环集碳架和官能团于一体 (一)大部分生物分子含有杂环 杂环(heterocycle)是碳环中有一个
免疫反应复合物,再加入通用试剂SA-BCPDA-Eu3+,其中SA是链霉亲合素(streptavidin,SA),借助SA与生物素的高特异和高亲合力的结合,把这种通用试剂连接到免疫反应复合物上,最终形成的复合物为:固相McAb-抗原(标准或样品)-(McAb-生物素)-(SA-BCPDA-Eu3+)[2]。本分析系统的特点是不用增强液,可在固相下直接测荧光。该系统共有三次放大作用,但放大倍数仍然远小于增强液系统,灵敏度可能略低,为此也有学者在最后一步加入增强液,进行液相荧光测定。三、酶放大时间
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