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文献和实验干货 | CUT and Tag 核心酶 Hyperactive PA/PG-Tn5 Transposase 大解密
CUT&Tag（Cleavage Under Targets and Tagmentation）是蛋白-DNA 互作的一大革新技术，它不需要使用甲醛交联以及免疫共沉淀，而是通过针对靶蛋白（如转录因子、染色质重塑蛋白）的抗体和 Protein A/G 的介导，使得与 Protein A/G 融合的 Tn5 酶(Tagmentase)在切割 DNA 片段的同时在序列两端加上测序接头，经 PCR 扩增后即可形成用于高通量测序的文库（见图 1 ）。CUT &Tag 技术具有细胞投入量低、信噪
1/L TBS(8.2) 37℃孵育l h，再次阻断非特异性吸附，吸去多余液体，不洗。 4、将PAg原液稀释10～20倍(1：30～1：100，淡红色为适宜稀释液)，载网浮于该液滴上，室温孵育10min至1h(37℃孵育2h?)。 5、0、02mo1/L TBS pH8.2，洗5min×3次。0.05mo1/L TBS pH7.4，洗5min×3次。最后切片浸于0.05m01/L TBS pH7.4缓冲液中，送电镜室处理(含2%戊二醛及3%多聚甲醛的TBS液固定30分钟
胶体金标记蛋白A技术（Protein A-gold technique PAg法）
电镜按1：20-50稀释，淡红色为适宜稀释液，胶体金稀释后应于当天使用，未用完的应该丢弃。（免疫胶体金说明书）｝ 2、清洗液： 0、5mol／L，pH7.4 Tris-Hcl缓冲液：Tris，60.57g，1mol／L Hcl约420m1，调pH值至7.4，最后加双蒸水至1000m1，此为储备液。 0、05mo1／L Tris缓冲生理盐水：氯化钠8.5-9g；0.5mo1／L，pH7.4 Tris-Hcl缓冲液100m1；加双蒸水至1000m1，调pH值至7.4. 0、02mo1／
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