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文献和实验,并孵育1~20 min 水洗终止反应; (6) 优化:如果需要可复染; (7) 用 DPX 封片。 氯萘酚 氯萘酚可以形成一种蓝黑色产物。敏感性低于 DAB,且产物可溶于醇中。它适用于当 DAB 反应形成较高背景或要求改变产物的颜色。 1. 需要的溶液和特殊设备 0.03% 氯萘酚,用无水乙醇溶解(贮存在-20℃),0.05 mol/L Tris(pH7.6),过氧化氢,Gelvatol 或者 Mowiol,光学显微镜(通常带有照相机以便于记录结果)。 2. 操作步骤 (1) 氯
的条件下只可暂时失活,但限制因素去除后又迅速恢复活性。常规高温高压灭菌方法和蛋白抑制剂不能使所有的Rnase 完全失活。 1.它广泛存在于人的皮肤上,因此制备 RNA 时必须戴手套。 2.RNase 的又一污染源是取液器。根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。一般情况下采用以 DEPC 配制的 70% 乙醇擦洗取液器的内部和外部,可基本达到要求。 3. 塑料制品、玻璃和金属物品的处理 (1)塑料制品:尽量使用一次性无菌塑料制品。已标明 RNase-free 的塑料制品,如没有开封使用过,通常
一、实验目的 1.掌握酶分离纯化的一般步骤及相关原理; 2.悉碱性磷酸酶的分离纯化的方法步骤。 二、实验原理 有机溶剂分级沉淀是分离蛋白质的常用方法之一。有机溶剂能使许多溶于水的酌生物大分子发生沉淀,其主要作用是降低水溶液的介电常数。例如20℃时水的介电常数为80,82%的乙醇溶液的介电常数为40。溶液的介电常数降低意味着溶质分子间异性电荷库仑引力增加,从而使溶质的溶解度降低
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