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- TBD
- 天津
- LTS1090CP
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温
- 保质期：
12个月
- 库存：
大量供应
- 供应商：
上海研谨生物科技
- 规格：
200ml/KIT
鸡脏器组织淋巴细胞分离液实验方法
本品用于分离鸡脏器组织淋巴细胞
技术文档编号：TBD0018SOP
【产品规格】
200ml/Kit
【产品组成】
为方便广大用户使用，试剂内容如下：
| 名称 | 产品编号 | 规格 | |
| A | XXXX 动物组织淋巴细胞分离液 | 200ml | |
| B | 样本稀释液（赠品） | 2010C1119 | 200ml |
| C | 清洗液（赠品） | 2010X1118 | 200ml |
| D | F 液（赠品） | F2013TBD | 200ml |
| E | 说明书 | 1 份 | |
【实验前准备】
适用仪器：最大离心力可达 1200g 的水平转子离心机
【检验方法】
全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。
- 首先制备组织单细胞悬液，制备方法详见“组织单细胞悬液制备技术”。
- 取一支 15ml 离心管，加入与组织单细胞悬液等量的分离液（注：分离液最少不得少于
3ml）。
- 用吸管小心吸取组织单细胞悬液加于分离液液面上，400-500g，离心 20-30min。（注：根据组织单细胞悬液量确定离心条件，组织单细胞悬液量越大，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。
- 离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为稀释液层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。
- 用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一 15ml 离心管中，向离心管中加入 10ml 清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。
- 250g，离心 10min。
- 弃上清。
- 用吸管以 5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。
- 250g，离心 10min。
- 重复 7、8、9，弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。
分离图例
【注意事项】
- 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果，最好在取样 2h 内进行实验，样品存放时间越长，细胞分离效果越差。样品放置超过 6h 后分离效果更差甚至不能达到分离目的。
- 本实验最好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。
- 吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加。
- 分离液用量大于组织单细胞悬液样本时，分离效果更佳。
- 如实验后细胞得率或活性过低，请联系研谨生物技术以寻求帮助。
【储存条件及有效期】
常温保存，有效期 2 年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启封后置常温保存。如 4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
【参考值（参考范围）】
本实验淋巴细胞提取率及纯度大于 80%。
下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。
| 红细胞 | 白细胞 | 血小板 | |||
| （4.0-10.0）×109 | |||||
| 含量（个/L） | （4.0-5.5）×1012 | 中性粒细胞 | 淋巴细胞 | 单核细胞 | （1.0-3.0）×1011 |
| 50%-70% | 20%-40% | 3%-8% | |||
【相关实验技术方案】
- 组织单细胞悬液制备技术。
- 所获得淋巴细胞的培养技术。
- 所获得淋巴细胞的核酸提取技术。
- 所获得淋巴细胞的鉴定方法A.流式细胞技术B.免疫组化技术C.原位杂交技术
D.PCR 技术
【可能存在的问题及解决方法】
1. 由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示：
| 出现情况 | 出现原因 | 建议解决方案 |
| 离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层 | 转速过小或离心时间过短 | 适当增减转速 |
| 离心后目的细胞存在于分离液中 | 转速过大或离心时间过长 | |
| 离心后白环层弥散 | 细胞密度过大 | 调整细胞密度 |
| 离心后白环层太浅或看不见 | 细胞密度过小 | |
- 本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离心时间，对离心转速进行调整。
- 本分离液依照国际标准，全部使用药用级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可
能出现红细胞沉降不完全的情况，可以适当加大离心转速。
注：在对离心条件进行调整时，离心转速的加减以 50-100g 为基数，直至达到最佳分离效果，离心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。离心时间以 20-30min 为准。
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文献和实验滤泡组织中有成熟的病毒，但从其他部位分离感染性病毒是困难的。分离主要是通过被感染个体的血球或肿瘤细胞与鸡胚肾细胞的混合培养来进行的。用鸡、鸭，鹌鹑等的胚纤维芽的组织培养细胞也可使它增殖。本病毒可通过病鸡的皮肤分泌物等进行呼吸道传播。
的疫苗称为病毒性疫苗。病毒性疫苗包括活病毒疫苗(活苗)和死病毒疫苗两类，如鸡新城疫中等毒力活疫苗、猪伪狂犬病灭活疫苗等。 除以上几种疫苗外，还有寄生虫疫苗、同源组织灭活疫苗脏器苗)、抗独特型抗体疫苗等。 疫苗的贮存和运输 购买疫苗时，应仔细检查疫苗瓶身是否有裂纹，瓶内是否有异物，瓶签所标明的生产日期和失效期。 在国内现有的条件下，活疫苗一般在-15℃条件下保存，灭活苗在2—8℃条件下保存。疫苗在运输过程中，应保持冷链运输系统的正常工作，疫苗要由冷库或温库进入冷藏
结核菌感染所引起的疾病。在埃及的木乃伊上有的也可看到结核性病变。结核菌有许多型，动物对各型的感受性是不同的，但除人以外，鸡、鸽、猫、猪、牛、猴、豚鼠、家兔等特别易于感染结核。人型结核菌的重要侵入门户是肺，初感染综合征90％以上见于肺，与此同时所属淋巴结也出现同样变化（淋巴道性）。牛型结核菌感染人体常常是经过肠道的淋巴滤泡。在日本这种感染例甚少。结核菌侵入人体后，常形成一种称为结核结节的特异性的肉芽组织。其中心部呈渗出性，周边部呈增生性的炎症反应。但这些组织象是由个体的感受性、脏器的种类
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