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- HZ0578
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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-20摄氏度保存
- 保质期：
1年
- 库存：
大量
- 供应商：
上海沪震生物科技有限公司
pCDNA6.2/EmGFP-Bsd/V5-DEST产品信息
订购信息
| 货号 | 载体名称 | 出品公司 | 载体用途 | 价格 | 到货周期 |
| HZ0578 | pCDNA6.2/EmGFP-Bsd/V5-DEST | 哺乳动物表达载体 | 2000 | 现货 |
产品参数
载体用途：哺乳动物表达载体
原核抗性：Ampicillin（氨苄青霉素）
真核筛选标记：Blasticidin
启动子：CMV promter
标签：C端带V5标签
表达水平：高
克隆方法：Gateway重组
5' 测序引物：CMV-f
3' 测序引物：V5 Reverse（5'-ACCGAGGAGAGGGTTAGGGAT-3'）
载体拷贝数：高
备注：pCDNA6.2/EmGFP-Bsd/V5-DEST是Gateway系统载体，不能单独使用，需要与供体载体、入门载体配套使用。
载体描述
pcDNA6.2/EmGFP-Bsd/V5-DEST vector allows you to rapidly clone your gene using Gateway technology and simultaneously express it with Emerald Green Fluorescent Protein (EmGFP) for easy identification of transfected cells. The EmGFP is derived from well-characterized fluorescent proteins of the jellyfish Aequorea victoria and has been humanized for optimal mammalian expression. If cloned with the TAG (amber) codon, your gene will be expressed in its native configuration and fully compatible with Tag-On-Demand" technology. If cloned without a stop codon, a V5-epitope tag will be fused to the carboxy-terminal end of your protein of interest. In either case, expression of EmGFP provides a bright fluorescent marker to easily identify cells co-expressing your protein. This marker allows you to focus your functional analysis on specific cells, or to sort and enrich for transfected cells in a derived population.
pcDNA6.2/EmGFP-Bsd/V5-DEST vector provides:
（1）PGK promoter for high-level expression of EmGFP fused to the Blasticidin (bsd)-resistance marker.
（2）CMV promoter for high-level expression of your protein.
（3）V5-epitope tag option to fuse to the C-terminal end of your protein, if desired.
pCDNA6.2/EmGFP-Bsd/V5-DEST实际上是一个双表达框载体，PGK启动子带一个EmGFP荧光标记基因，CMV启动子调控外源基因的表达。不过，要把外源基因插入至CMV启动子后面，只能用LR重组的方法实现，所以，外源基因需要先构建至Entry载体上，例如pENTR/D-TOPO等。
pCDNA6.2/EmGFP-Bsd/V5-DEST空载上，CMV启动子后有ccdB表达框，所以此空载体只能在DB3.1等专用的大肠杆菌中才能复制扩增，使用此载体时，请注意配套相应的DB3.1感受态。当外源基因成功插入，ccdB表达框将被置换掉，此时，重组质粒可以在DH5α、TOP10等常规大肠杆菌中扩增复制。
质粒图谱
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文献和实验光释放光被物镜采集，并聚焦于物镜和PMT之间的共焦小孔上，由PMT接收，处于芯片样点外的荧光和杂散光则被共焦小孔阻挡，不能进入PMT。共聚焦的这一个工作特点，可大大减少由于片基和灰尘产生的背景噪声，提高检测的灵敏度。PMT的荧光扫描仪需要移动扫描器或移动物镜和生物芯片，对芯片各点进行扫描，以获得整幅荧光信息。扫描器移动后要求物镜能采集到荧光释放光束，这样的物镜很复杂且数值孔径不超过0.3，较为简单的并且采集光效率高的办法，是移动物镜或生物芯片，即实现物镜和生物芯片的X-Y方向二维运动。在国内外的同类
梭菌。PCR 反应体系和参数见附表 2 和表 3。反应体系中各试剂的量可根据具体情况或不同的反应总体积进行适当的调整。PCR 检测时反应体系应设置阳性对照、阴性对照和空白对照。用 A、B、E、F 型肉毒梭菌的基因组 DNA 作阳性对照，用非肉毒梭菌基因组 DNA 作阴性对照，用无菌超纯水作空白对照。5. 凝胶电泳检测 PCR 产物 用 0.5 X TBE Buffer 制备 1.2%~1.5% 的琼脂糖凝胶（凝胶加热融化后冷却至 60 ℃ 左右加入 EB 至 0.5 μg/ ml），将 10 μL
。 ( 2 ) 尿素和硫脲的溶解约需 30 min。绝对禁止用加热的方法促进缓冲液溶解。可以用超纯水（18.2 MΩ cm 电阻率）配制缓冲液。 ( 3 ) 应先配制 20% Triton X-100 溶液，保存在 4°C 备用。 ( 4 ) 根据等电聚焦步骤中选择的 IPG 胶条的 pH 梯度，选择合适的 IPG 缓冲液。 ( 5 ) 虽然此方案只有一次重复取样，但通常每个样品能够提取 3 次蛋白质，所有提取蛋白量能够进行 5 次双向电泳。 ( 6 ) 在离心之前离心机温度降到 0°C
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